Введение
ГЛАВА 1 Ферментативные методы анализа и иммобилизация ферментов 11
1.1 Ферментативные методы анализа 11
1.2 Иммобилизованные ферменты 13
1.3 Носители для иммобилизации ферментов 17
1.4 Методы иммобилизации ферментов 19
1.5 Наноалмазы как носители иммобилизованных ферментов 26
1.6 Биолюминесцентное тестирование 31
1.7 Ферментативные методы определения глюкозы и холестерина 34
ГЛАВА 2 Материалы и методы 41
2.1 Материалы и реагенты 41
2.2 Функционализация поверхности МНА 43
2.3 Адсорбция люциферазы на частицы МНА 44
2.4 Конструирование биолюминесцентной тест-системы 45
2.5 Ковалентная иммобилизация ферментов на частицы МНА 47
2.6 Определение емкости МНА при иммобилизации ферментов 48
2.7 Оценка активности комплексов МНА-ферменты 49
2.8 Динамика образования продукта реакции окислительного азосочетания 50
2.9 Многократное использование комплексов МНА-ферменты 2.10 Оценка активности комплексов МНА-ферменты в зависимости от физико-химических параметров среды 52
2.11 Оценка образования продукта реакции, катализируемой комплексами МНА-ферменты, в зависимости от концентрации анализируемого вещества 53
2.12 Определение концентраций глюкозы и холестерина в сыворотке крови человека in vitro 53 2.13 Измерение интенсивности свечения люциферазы 54
2.14 Определение элементного состава МНА 54
ГЛАВА 3 Исследование каталитической функции МНА в реакции окислительного азосочетания 55
3.1 Реакция окислительного азосочетания, катализируемая частицами МНА 55
3.2 Участие поверхностных микропримесей металлов в каталитической активности МНА 57
3.3 Элементный анализ поверхностных примесей МНА 59
ГЛАВА 4 Конструирование и изучение свойств биолюминесцентной тест системы на основе МНА, люциферазы и полимерной матрицы 63
4.1 Создание и изучение комплекса МНА-люцифераза 63
4.2 Выбор оптимальной полимерной матрицы 66
4.3 Конструирование тест-системы на основе полимерной матрицы, МНА и люциферазы 4.3.1 Тест-система «полимерная матрица–МНА + люцифераза» 70
4.3.2 Тест-система «полимерная матрица + МНА + люцифераза» 75
4.3.3 Тест-система «полимерная матрица + комплекс МНА-люцифераза» 4.4 Обоснование необходимости использования МНА в конструировании индикаторных тест-систем 79
4.5 Получение индикаторного комплекса МНА-люцифераза с использованием белкового экстракта 82
4.6 Тест-система «полимерная матрица–брушит + люцифераза» 85
4.7 Тест-система «полимерная матрица + комплекс МНА-брушит-люцифераза» 87
4.8 Получение индикаторной тест-системы в высушенном виде 89
ГЛАВА 5 Конструирование и исследование свойств систем биохимического определения глюкозы и холестерина на основе МНА и ферментов 91
5.1 Концепция создания систем биохимического определения глюкозы и холестерина 91
5.2 Ковалентная иммобилизация ферментов на поверхность МНА 92
5.3 Исследование комплексов МНА-иммобилизованные ферменты 94
5.4 Оценка практического применения сконструированных систем в сыворотке крови in vitro 104
5.5. Оценка длительного хранения сконструированных тест-систем 106
Заключение 108
Выводы 110
Список сокращений 112
Литература 113
