Введение
Глава 1.Обзор литературы 23
1.1. Общая характеристика системы IGF/инсулин 23
1.2. Инсулиноподобный фактор роста 1 типа (IGF-1) 28
1.3. Рецептор инсулиноподобного фактора роста 1 типа (IGF-1R)
1.3.1. Регуляция экспрессии гена IGF-1R 36
1.3.2. Сигнальная трансдукция, опосредуемая IGF-1R 39
1.4. Роль IGF-1 и его рецептора IGF-1R в канцерогенезе 45
1.4.1. Эпидемиологические исследования взаимосвязи между экспрессией IGF-1 и IGF-1R и злокачественной трансформацией .45
1.4.2. Молекулярно-генетические исследования взаимосвязи между экспрессией IGF-1 и IGF-1R и злокачественной трансформацией 1.5. Развитие молочной железы мыши 55
1.6. Рак молочной железы, индуцированный гиперэкспрессией Wnt1 60
1.7. Роль IGF-1 и его рецептора IGF-1R в прогрессии множественной миеломы человека 65
1.7.1. Роль IGF-1 и его рецептора IGF-1R в селективной локализации
клеток миеломы в костном мозге 67
1.7.2. Роль IGF-1 в регуляции пролиферации клеток множественной миеломы 71
1.7.3. Роль IGF-1 в регуляции остеолизиса 73
1.8. Возникновение МЛУ является существенным фактором в прогрессии множественной миеломы .74
1.8.1. Роль IGF-1 и его рецептора IGF-1R в регуляции механизмов возникновения МЛУ при ММ человека 82
1.8.2. Роль IGF-1 и его рецептора IGF-1R в выживании опухолевых клеток при множественной миеломе 85
1.9. Роль IGF-1 в регуляции апоптоза, индуцируемого IL-1 97
1.9.1. Про-апоптотические цитокины IL-1 и IL-1 98
Глава 2. Материалы и методы исследования 101
2.1. Трансгенные линии мышей 101
2.2. Генотипирование 102
2.3. Приготовление препаратов молочной железы
2.3.1. Приготовление тотального препарата молочной железы 103
2.3.2. Окрашивание гематоксилин-эозином 104
2.3.3. Исследование пролиферации клеток эпителия молочной железы с использованием бромдезоксиуридина (BrdU) .104
2.4. Получение первичной культуры клеток эпителия молочной железы мыши 105
2.4.1. Процедура покрытия чашки матригелем .107
2.4.2. Исследование экспрессии казеинов в первичной культуре клеток эпителия молочной железы in vitro 108
2.4.3. Отделение первичных клеток эпителия молочной железы от матригеля 1 2.5. Исследование экспрессия бета казеина в линии клеток эпителия молочной железы мыши НС11 109
2.6. Выделение белка из ткани молочной железы мыши .110
2.7. Вестерн - блот гибридизация 110
2.8. Иммунопреципитация 111
2.9. Проточная цитометрия 1 2.10. Клинический материал и выделение РНК из клеток костного мозга 113
2.11. Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) 114
2.12. Исследование активности эффекторных каспаз 3 и 7 115
2.13. Линии клеток множественной миеломы 116
2.14. Оценка выживаемости клеток ММ колориметрическим
методом (МТТ) и методом подсчета 116
2.15. Статистическая обработка результатов 117
Глава 3. Результаты исследования .119
3.1. Исследование роли IGF-1R в дифференцировке на модели молочной железы мыши .119
3.1.1. Исследование мышей, экспрессирующих dnIGF-1R под WAP промотором .121
3.1.2. Исследование мышей, экспрессирующих dnIGF-1R под MMTV промотором 129
3.1.3. Исследование роли IGF-1R - зависимого сигнального пути в канцерогенезе молочной железы, опосредуемом Wnt1 .140
3.1.4. Исследование роли IGF-1 и IGF-2 в функциональной дифференцировке клеток молочной железы НC11 .148
3.2. Исследование роли IGF-1 и его рецептора IGF-1R в регуляции МЛУ при множественной миеломе человека 152
3.2.1. Исследование экспрессии мРНК IGF-1 и мРНК генов,
отвественных за возникновение МЛУ в клиническом материале 152
3.2.2. Зависимость общей выживаемости пациентов с ММ от уровня экспресссии гена IGF-1 165
3.2.3. Исследование роли IGF-1 в регуляции экспрессии мРНК генов МЛУ на моделях линий культур клеток множественной
миеломы человека 168
3.3. Исследование роли IGF-1 в регуляции выживаемости нормальных и опухолевых клеток 174
3.3.1.Исследование IGF-1- зависимой регуляции активности каспаз 3 и 7 174
3.3.2. Исследование влияния IGF-1 на выживаемость клеток множественной миеломы человека 178
3.3.2.1. Экспрессия мРНК генов системы IGF/инсулин в линиях клеток множественной миеломы человека 178
3.3.2.2. Исследование влияния фактора роста IGF-1 на выживаемость линий клеток множественной миеломы человека методом МТТ.. 180
3.3.2.3. Исследование выживаемости линий клеток множественной миеломы человека методом подсчета 182
3.3.2.4. Исследование влияния фактора роста IGF-1 на динамику выживаемости линий клеток множественной миеломы человека .185
3.3.2.5. Исследование экспрессии мРНК генов CycB1 и CycD1 и мРНК генов, принадлежащих семействам Bcl-2 и IAP 188
Глава 4. Осуждение результатов 193
4.1. Роль IGF-1 и его рецептора IGF-1R в регуляции дифференцировки молочной железы 193
4.1.1. Исследование мышей, экспрессирующих dnIGF-1R
под WAP промотором .194
4.1.2. Экспрессии казеинов в первичной культуре клеток эпителия молочной железы, полученных от мышей, экспрессирующих dnIGF-1R под MMTV промотором, и в линии клеток молочной железы HC11 198
4.1.3. Исследование мышей, экспрессирующих dnIGF-1R под MMTV промотором .200
4.2. Роль IGF-1R - зависимого сигнала в канцерогенезе молочной железы, опосредуемом Wnt1 .205
4.3. Роль IGF-1 и его рецептора IGF-1R в регуляции МЛУ
при множественной миеломе человека 211
4.4. Влияние IGF-1 на выживаемость клеток множественной миеломы человека 215
4.5. IGF-1- зависимая регуляция активности каспаз 3 и 7 220
Заключение .224
Выводы 229
Список сокращений и условных обозначений
