Введение
Глава 1. Нжроксильные спиновые метки и их применение для изучения сериковых щролаз . 9
1.1. Спектры ЭПР нитроксильных радикалов 10
1.2. Определение скоростей вращения 14
1.3. Параметры, характеризующие полярность окружения 15
1.4. Взаимодействие между парамагнитными частицами. 16
1.5. Сериновые гидролазы и метод спиновых меток... 18
1.6. cd-XTP и холинэстеразы - общие сведения... 20
1.7. Изучение оС-1П? методом спиновых меток 23
1.8. Холинэстеразы 33
1.8.1. Использование ковалентно связывающихся спин-меченых ингибиторов 33
1.8.2. Нековалентно связывающиеся ингибиторы 37
Глава 2. Материмы и методы 42
Глава 3. Взаимодействие спин-меченого производного индола с сывороточным алъбушном 68
3.1. Експерименти по конкуренции 74
3.2. Влияние органических растворителей 76
3.3. САЧ, ковалентно модифицированный спиновой меткой 85
3.4. Влияние рН и ионной силы среды 94
3.5. Температура денатурации комплекса 1-ЬСА 96
3.6. Связывание антибиотиков и ингибиторов с САЧ... 99
Глава 4. Изучение активного центра 105
4.1. Спектр ЫГР комплекса 1І-ХТР 106
4.2. Влияние парамагнитных катионов и анионов 108
4.3. Введение спинового зонда в активный центр Фосфорил-химо трипсина 110
4.4. Концентрационная зависимость кажущейся константы диссоциации комплекса П-ХТР 111
4.5. Влияние органических растворителей на комплекс П-ХТР ±16
4.6. КонФормационное изменение при переходе от нейтральных к кислым значениям рН 120
4.7. Взаимодействие сшшовол метки II с трипсином . 129
Глава 5. Взашюле-ствие спин-ыеченнх ингибиторов с активй-ы центров БуХЭ 131
5.1. Спектр оПР соединения в присутствии Б;уХЭ 133
5.2. Локализация радикала ТІЇ в комплексе с БуХЭ...136
5.3. Сопоставление данных ЭИР и ферментативное кинетики 138
5.4. Влияние ионной силы и органического растворителя на связывание 111 с БуХЗ 143
5.5. Расположение нитроксила Пі в углублении белковом молекулы 147
5.6. Влияние рН на взаимодействие III с БуХЭ 149
5.7. Не специфические центры связывания 152
5.8. Взаимодействие нитроксила I с БуХЭ 153
5.9. Бзашлодеиствие нитроксила 1У с БуХЭ 154
5.10. Влияние спин-меченого новокаина на активность БуХЭ 158
5.11. Взаимодействие катионов парамагнитных металлов с БуХЭ 159
Заключение 167
Выводы 169
Список литературы 171
