Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Методы синтеза, структура и физико-химические свойства нанодисперсного диоксида церия
1.2. Токсичность нанодисперсного диоксида церия
1.2.1. Факторы влияющие на токсичность нанодисперсного диоксида церия 17-20
1.2.2. Накопление в организме и клиренс нанодисперсного диоксида церия 20-22
1.3. Биологическая активность нанодисперсного диоксида церия 22
1.3.1. Энзимоподобная активность нанодисперсного диоксида церия 22-27
1.3.2. Влияние нанодисперсного диоксида церия на репродуктивную систему 27-28 млекопитающих.
1.3.3. Влияние нанодисперсного диоксида церия на пролиферативную 28-29 активность клеток.
1.3.4. Антиоксидантные, УФ- и радиопротекторные свойства нанодисперного 29-35 диоксида церия.
1.4. Адресная внутриклеточная доставки нанодисперсного диоксида 35-36
церия
1.4.1. Наночастицы церия как активное средство внутриклеточной доставки 36-38 лекарств.
1.4.2. Полиэлектролитные микрокапсулы как системы доставки 38 бионаноматериалов.
Заключение по обзору литературы
ГЛАВА 2. Материалы и методы 39
2.1. Химические реактивы, среды и материалы 39
2.2. Схема синтеза и анализ физико-химических характеристик нанодисперсного диоксида церия
2.2.1. Пробоподготовка нанодисперсного диоксида церия 39
2.2.2. Анализ гидродинамического радиуса и дзета-потенциала нанодисперсного диоксида церия
2.2.3. Просвечивающая электронная микроскопия нанодисперсного диоксида церия
2.2.4. УФ видимая спектроскопия нанодисперсного диоксида церия
2.3. Анализ уровня пероксида водорода и гидроксильного радикала 40-41
2.4. Модели окислительного стресса in vitro и in vivo 41-42
2.4.1. Окислительный стресс, индуцированный экзогенным пероксидом водорода
2.4.2.Окислительный стресс, индуцированный воздействием низкотемпературной аргоновой плазмы (НТАП).
2.4.3. Окислительный стресс, индуцированный воздействием ультрафиолетового излучения.
2.4.4. Окислительный стресс, индуцированный воздействием рентгеновского излучения.
2.5. Культуры клеток 42-44
2.6. Анализ жизнеспособности клеточных культур
2.6.1. Приготовление суспензии клеток и подсчет клеток. 44
2.6.2. ЛДГ-тест 44
2.6.3. Метод дифференцированного флуоресцентного окрашивания клеток 44-45
2.6.4. Анализ уровней АФК in vitro. 45
2.6.5. Конфокальная микроскопия клеточных культур 45
2.6.6. Просвечивающая электронная микроскопия клеточных культур 45
2.6.7. Сканирующая электронная микроскопия клеточных культур 46
2.6.8. Проточная цитометрия 46
2.6.9. МТТ-тест 46-
2.6.10. Культивирование клеток в трехмерном матриксе коллагенового геля. 47
2.6.11. Анализ пролиферативной активнсоти клеточной культуры
2.7. Выделение и культивирование ооцитов 47
2.8. Животные 2.9. Микроядерный тест 49
2.10. ПЦР в реальном времени 49
2.10.1.Экстракция тотальной РНК тризоловым методом 49
2.10.2.Электрофорез РНК
2.10.3. Обратная транскрипция 50
2.10.4. ПЦР-амплификация в режиме реального времени 50
2.10.5.Определение уровня экспрессии генов 50
2.10.6. Гены
2.11. Анализ распределения нанодиспесного диоксида церия в организме модельных животных
2.12. Полиэлектролитные микрокапсулы 52-
2.12.1. Синтез полиэлектролитных микрокапсул 52
2.12.2. Просвечивающая электронная микроскопия полиэлектролитных микрокапсул
2.12.3. Сканирующая электронная микроскопия полиэлектролитных микрокапсул
2.12.4. Конфокальная микроскопия полиэлектролитных микрокапсул
2.12.5. Элементный анализ полиэлектролитных микрокапсул 52
2.13. Статистический анализ данных 53
ГЛАВА 3. Результаты 54
3.1. Исследование физико-химических характеристик и агрегативной 54-58
устойчивости цитрат-стабилизированных наночастиц диоксида церия в
различных биологических средах.
3.2. Исследование воздействия нанодисперстного диоксида церия на культуры субстратзависимых клеток млекопитающих.
3.3. Исследование влияния цитрат-стабилизированных наночастиц диоксида церия на активность митохондриальных дегидрогеназ.
3.4. Исследование влияния наночастиц СеО2 на жизнеспособность и 63-69
пролиферативную активность первичных эмбриональных фибробластов in vitro
3.5. Исследование эмбриотоксического действия наночастиц СеО2 и их влияния на эмбриогенез in vitro.
3.6. Исследование влияния нанодисперстного диоксида церия на морфологию клеток
3.7. Исследование влияния цитрат-стабилизированных наночастиц диоксида церия на морфологию и функциональную активность фибробластов человека, культивируемых в трехмерном матриксе коллагенового геля.
3.8. Исследование внутриклеточной локализации цитрат-стабилизированных наночастиц диоксида церия и их влияния на ультраструктуру клеток млекопитающих.
3. 3.9. Протекторное действие цитрат-стабилизированных наночастиц СеО2, вразличных моделях окислительного стресса .
3.9.1. Протекторное действие цитрат-стабилизированных наночастиц СеО2, вмодели окислительного стресса, индуцированного экзогенным пероксидом водорода.
3.9.2. Протекторное действие цитрат-стабилизированных наночастиц СеО2 , 81 вмодели окислительного стресса, индуцированного воздействие УФ излучения.
3.9.3. Протекторное действие цитрат-стабилизированных наночастиц СеО2, 82-84 вмодели окислительного стресса, индуцированного воздействием низкотемпературной аргоновой плазмы.
3.9.4. Протекторное действие цитрат-стабилизированных наночастиц СеО2, вмодели окислительного стресса, индуцированного воздействием рентгеновского излучения.
3.10. Разработка системы внутриклеточной доставки цитрат- 97
стабилизированных наночастиц СеО2 на основе полиэлектролитных
микрокапсул.
3.10.1. Оценка физико-химических свойств и морфологии синтезированных 96-99 микрокапсул
3.10.2. Исследование процесса поглощения и внутриклеточной локализации 99-101 синтезированных микрокапсул.
3.10.3. Исследование защитного действия модифицированных микрокапсул в 102-105 модели окислительного стресса, индуцированного экзогенным пероксидом водорода.
3.11. Анализ перспектив использования полиэлектролитных микрокапсул 105-115
модифицированных наночастицами диоксида церия в биомедицинских
целях.
Заключение
116-1 Выводы
Список основных публикаций по теме диссертации
Список использованных литературных источников
