Введение
Глава 1. Гипоталамо-гипофизарно-тестикулярная система . 12
1.1.1. Общие сведения о гипоталамо-гипофизарно-тестикулярной оси 12
1.1.2. Функции тестостерона в организме 13
1.1.3. Гипоталамическая регуляция репродуктивной системы 15
1.1.4. Гипофизарная регуляция репродуктивной системы 17
1.1.5. Регуляция синтеза тестостерона в семенниках с помощью рецептора лютеинизирующего гормона 19
Глава 2. Низкомолекулярные агонисты рецептора лютеинизирующего гормона 22
1.2.1. Классификация аллостерических регуляторов рецепторов GPCR 24
1.2.2. Особенности действия аллостерических регуляторов GPCR 26
1.2.3. Аллостерические регуляторы рецептора лютеинизирующего гормона 28
Глава 3. Стероидогенез в клетках Лейдига семенников 33
1.3.1. Транспорт холестерина в митохондрии 33
1.3.2. Регуляторный белок StAR 35
1.3.3. Синтез тестостерона в клетках Лейдига семенников 36
1.3.4. Нарушение стероидогенеза в клетках Лейдига при старении 39
1.3.5. Нарушение стероидогенеза при диабетической патологии 40
2. Материалы и методы 42
2.1. Разработка и синтез серии тиенопиримидиновых производных 42
2.2. Моделирование физиологических состояний и схемы экспериментов с использованием лабораторных животных 44
2.2.1. Схемы введения препаратов 44
2.2.2. Моделирование сахарного диабета 1-го типа 46
2.2.3. Изучение стареющих самцов крыс 47
2.3. Получение первичной культуры клеток Лейдига из семенников крыс 47
2.4. Выделение тестикулярных, тироидальных и овариальных мембран крыс 48
2.5. Измерение активности аденилатциклазы 49
2.6. Определение ГТФ-связывания G-белков 49
2.7. Иммуноферментный анализ 50
2.8. Выделение тотальной РНК, обратная транскрипция и количественная ПЦР в реальном времени 51
2.9. Статистическая обработка результатов 52
3. Результаты 53
3.1 Тиенопиримидиновые производные активируют рецептор ЛГ/ХГЧ, повышая активность аденилатциклазы, и селективно стимулируют Gs-белок в тестикулярных мембранах семенников, не влияя на рецептор ТТГ 53
3.1.1. Разработанные нами тиенопиримидиновые производные селективно активируют аденилатциклазу через рецептор ЛГ/ХГЧ, но не влияют на рецептор ТТГ 54
3.1.2. Тиенопиримидиновые производные селективно активируют Gs-белки в тестикулярных и овариальных мембранах 61
3.2. Тиенопиримидиновое производное ТП03 с активностью агониста рецептора ЛГ/ХГЧ стимулирует повышение уровня тестостерона и влияет на экспрессию стероидогенных генов в первичной культуре клеток Лейдига семенников 65
3.3. Тиенопиримидиновые производные повышают уровень тестостерона в крови и стимулируют стероидогенез в семенниках при разных способах и длительности их введения самцам крыс 69
3.3.1. Влияние однократного введения тиенопиримидиновых производных на уровень тестостерона и стероидогенез в семенниках крыс 69
3.3.2. Изучение влияния однократного введения ТП03 на стероидогенную функцию семенников крыс в сравнении с ХГЧ 70
3.3.3. Влияние длительного введения ТП03 и ХГЧ на уровень тестостерона и экспрессию в семенниках крыс 74
3.4. Стимулирующие эффекты ТП03 и ХГЧ на уровень тестостерона у самцов крыс при их однократном и длительном совместном введении 79
3.4.1. Влияние совместного действия тиенопиримидиновых производных и ХГЧ на активность АЦ в тестикулярных мембранах 79
3.4.2. Влияние однократного введения субмаксимальной дозы ХГЧ крысам, предварительно обработанным ТП03, на продукцию тестостерона 80
3.4.3. Влияние однократного и длительного введения ТП03 и ХГЧ в низких дозах на уровень тестостерона и стероидогенез в семенниках крыс 81
3.5. Влияние ТП03 на стероидогенную функцию семенников при старении и в условиях сахарного диабета 1-го типа. 86
3.5.1. Влияние старения на репродуктивную функцию крыс в возрасте 15 месяцев 87
3.5.2. Влияние обработки ТП03 и ХГЧ на уровень тестостерона и стероидогенез в семенниках стареющих самцов крыс 87
3.5.3. Влияние среднетяжелой формы сахарного диабета 1-го типа на уровень тестостерона и стероидогенез в семенниках крыс 91
3.5.4. Влияние ТП03 и ХГЧ на уровень тестостерона в крови и стероидогенез в семенниках крыс с СД1 92
4. Обсуждение результатов 98
5. Заключение 110
6. Выводы 111
7. Список цитируемой литературы 113
