Введение
1. Конформационные свойства глобулярных еежов 11
1.1. Принципы организации и стабилизации структуры 11
1.2. Круговой дихроизм 18
1.2.1. Определение вторичной структуры из спектров 20
1.2.2. Спектры в ближней УФ-области 25
2. Круговой дихроизм ингибиторов протеаз и их комплексов с протеиназами 32
2.1. Вторичная структура 34
2.2. Третичная структура 47
2.3. Свойства комплекса ингибитор-протеиназа 57
Материалы и методы исследования 68
1. Материалы 68
2. Спектрофотометрические измерения 69
2.1. Спектры КД и спектры поглощения 69
2.2. Собственная флуоресценция 71
2.3. Флуоресценция зонда 71
3. Гель-хроматография 72
4. Седиментационный анализ 73
5. Электрофорез в полиакриламидном геле 73
6. Изоэлектрофокусирование в геле 74
7. Диссоциация комплекса фермент-ингибитор 74
8. Ограниченный протеолиз 75
9. Восстановление дисульфидных связей 75
10. Оцределение содержания сульфгидрильных групп 76
11. Модификация остатков лизина 76
12. Модификация остатков аргинина 77
13. Модификация остатков тирозина 77
14. Определение ингибиторной активности 79
1. Сравнительный анализ конформацйи ингишторов протеаз из фасоли и картофеля 81
1.1. Конформация нативных молекул ингибиторов 82
1.2. Влияние денатурирующих агентов на конформацшо ингибитора из фасоли 86
1.3. Влияние денатурирующих агентов на конформацию ингибитора из картофеля 87
1.4. Флуоресцентные свойства ингибиторов 92
2. Особенности превращений образовании фенлент-ингибиторных комплексов 99
2.1. Взаимодействие химотрипсина с нативными ингибиторами из фасоли и картофеля 100
2.2. Взаимодействие химотрипсина с ингибитором из картофеля, модифицированным с помощью ограниченного протеолиза 105
2.3. Связывание флуоресцентного зонда с комплексом химотрипсин-ингибитор из картофеля 106
3. Природа комплексов ингибитора из картофеля с протеиназами . 110
3.1. Физико-химическая характеристика 111
3.2. Стехиометрия взаимодействия 114
3.3. О взаимосвязи структуры и функции 119
4. Влияние модификации функциональных груш ингибитора из картофеля на его взаимодействие с протеиназжи . 122
4.1. Восстановление дисульфидных связей 123
4.2. Модификация остатков основных аминокислот -аргинина и лизина 125
4.3. Модификация остатков тирозина 131
Заключение 139
Выводы 145
Литература 147
