Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Синтез, процессинг и транспрт нейротрофинов.
1.2. Рецепторы нейротрофинов.
1.3. Фактор роста нервов (NGF)
1.4. Нейротрофический фактор мозга (BDNF) 17
1.5. Моделирование патологических условий с помощью бета-амилоида 21
1.6. Заключение.
ГЛАВА 2. Методы исследования 24
2.1. Создание генно-инженерной конструкции для обеспечения оверэкспрессии NGF и
BDNF в гиппокампе 24
2.1.1. Получение генов NGF и BDNF методом полимеразной цепной реакции 24
2.1.2. Клонирование ПЦР-продуктов в «служебный» p-GEM вектор 25
2.1.3. Подготовка генов NGF и BDNF к клонированию в рабочий вектор 25
2.1.4. Подготовка рабочего вектора к клонированию 26
2.1.5. Лигирование генов NGF и BDNF в вектор pCMV 27
2.1.6. Трансформация компетентных клеток и выделение плазмидных ДНК 27
2.1.7. Рестрикционный анализ 28
2.1.8. Сборка вирусных систем для обеспечения оверэкспрессии NGF и BDNF.. 29
2.2. Исследование влияния оверэкспрессии NGF и BDNF на параметры LTP в
гиппокампе крыс в нормальных и патологических условиях 29
2.2.1. Содержание животных 30
2.2.2. Инъекция лентивирусных суспензий в зубчатые фасции гиппокампов экспериментальных животных 30
2.2.3. Приготовление переживающих срезов мозга 30
2.2.4. Инкубация срезов в растворе Р-амилоидного пептида 31
2.2.5. Перемещение срезов в экспериментальную камеру и установка электродов.31
2.2.6. Поиск оптимального сигнала и подбор рабочей интенсивности стимула... 32
2.2.7. Регистрация ВПСП 33
2.2.8. Парная стимуляция 33
2.2.9. Тетанизация
2.2.10. Инкубация срезов в растворах ингибиторов киназных каскадов 34
2.2.11. Обработка результатов 34
2.3. Оценка эффективности лентивирусной трансдукции 35
2.3.1. Визуализация трансдуцированных клеток 35
2.3.2. Количественная оценка изменения концентраций NGF и BDNF в гиппокампе экспериментальных животных вследствие лентивирусной трансдукции 36
2.4. Заключение 37
ГЛАВА 3. Эффективность лентивирусной трансдукции 38
3.1. Локализация трансдуцированных клеток 38
3.2. Увеличение концентрации NGF и BDNF вследствие вирусной трансдукции .39
3.3. Заключение 43
ГЛАВА 4. Долговременная потенциация на фоне оверэкспрессии неиротрофинов в нормальных условиях 44
4.1. Контрольные группы 44
4.2. Группы с оверэкспрессией нейротрофинов 46
4.3. Парное отношение и пресинаптический компонент пластичности 48
4.4. Заключение 49
ГЛАВА 5. Долговременная потенциация на фоне оверэкспрессии нейротрофинов в патологических условиях .
5.1. Подавление посттетанической потенциации бета-амилоидным пептидом.Error! Bookmark not defined.
5.2. Различия в нейропротекторном эффекте NGF и BDNF 53
5.3. Заключение 56
ГЛАВА 6. Возможные механизмы реализации неиропротекторного эффекта фактора роста нервов .
6.1. Каскад фосфатидилинозитол-3-киназы 58
6.2. Каскад активируемой митогенами протеин-киназы.Error! Bookmark not defined.
6.3. Каскад фосфолипазы-С 62
6.3. Заключение 64
Заключение 65
Выводы 66 благодарности 67
Список литературы 68
Список сокращений
