Введение
1. Обзор литературы 11
1.1. Эпидемиология грибковых заболеваний 11
1.2. Основные успехи и проблемы противогрибковой фармакотерапии 13
1.3. Основные фармакологические мишени действия противогрибковых лекарственных соединений 19
1.4. Практика создания новых противогрибковых лекарственных средств 25
1.5. Фармакологические эффекты карбазольных соединений 30
1.6. Соединения ряда ксеномицинов 32
2. Материалы и методы исследования 34
2.1 Материалы 34
2.1.1 Исследуемые соединения и готовые лекарственные формы 34
2.1.2 Использованные штаммы 35
2.1.3 Клеточные культуры 36
2.1.4 Общая характеристика экспериментальных животных 36
2.1.5 Реактивы 36
2.2 Исследования специфической фармакологической активности 36
2.2.1 Скрининговое исследование противогрибковой активности in vitro 39
2.2.2 Исследование противогрибковой активности соединений in vivo 40
2.2.2.1Исследование активности CBL0100 на модели трихофитии морских свинок 40
2.2.2.2Исследование активности PLX01107 на модели аспергиллза лгких у мышей 42
2.3 Генотоксикологические исследования 43
2.3.1 Предварительная оценка цитотоксичности соединений 43
2.3.2 Тест на индукцию генных мутаций in vitro (тест Эймса) 45
2.3.3 Оценка кластогенной активности в тесте по учту хромосомных аберраций
2.3.3.1 В культуре клеток крови человека 46
2.3.3.2 В клетках костного мозга мышей in vivo 46
2.3.4 Оценка кластогенной активности методом учта микроядер с цитокинетическим блоком в культуре клеток крови человека 47
2.3.5 Оценка ДНК-повреждающей активности методом ДНК-комет 48
2.3.5.1 В культуре клеток крови человека 48
2.3.5.2 В органах и тканях мышей
2.4 Исследования острой токсичности 49
2.5 Исследование фармакокинетики и биораспределения CBL0100
2.5.1 Нанесение препаратов, отбор крови, органов и тканей 49
2.5.2 Приготовление растворов CBL0100 для построения калибровочных кривых 50
2.5.3 Приготовление гомогенатов органов и тканей 50
2.5.4 Приготовление образцов. 50
2.5.5 Определение связывания CBL0100 с клеточными компонентами крови 50
2.5.6 Хроматографический анализ 51
2.5.7 Фармакокинетические параметры 52
2.6 Статистическая обработка результатов исследований 53
3. Результаты исследования 54
3.1 Скрининговые иследования in vitro 54
3.1.1 Специфическая фармакологическая активность соединений CBL0-группы in vitro 54
3.1.2 Оценка мутагенной активности соединений в тесте Эймса
3.1.2.1 Ксеномицины CBL0159, CBL0100 и CBL0253 55
3.1.2.2 Ксеномицины PLX01107 и PLX01008 58
3.2 Исследования цитотоксического и генотоксического потенциала соединений в
эукариотических тестах 63
3.2.1 Соединение CBL0100 63
3.2.1.1 Оценка ДНК-повреждающей активности CBL0100 в культуре клеток крови человека 63
3.2.1.2 Оценка кластогенной активности CBL0100 методом учта хромосомных аберраций в культуре клеток крови человека 64
3.2.1.3 Оценка ДНК-повреждающей активности CBL0100 методом ДНК-комет в органах и тканях мышей in vivo 66
3.2.1.4 Оценка кластогенной активности CBL0100 методом учта хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей in vivo 68
3.2.2 Соединения PLX01008 и PLX01107 69
3.2.2.1 Оценка кластогенной активности PLX01008 и PLX01107 методом учта микроядер с цитокинетическим блоком в культуре клеток крови человека 69
3.2.2.2 Оценка цитогенетической активности PLX01008 и PLX01107 в тесте по учту хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей in vivo 71
3.3 Исследования острой токсичности 73
3.3.1 Ксеномицин CBL0100 74
3.3.2 Ксеномицин PLX01107 75
3.4 Специфическая фармакологическая активность 77
3.4.1 Исследование активности CBL0100 в отношении T. mentagrophytes in vitro 77
3.4.2 Исследование активности CBL0100 на модели трихофитии морских свинок 77
3.4.3 Исследование активности PLX01107 на модели аспергиллза лгких у мышей 83
3.5 Исследование фармакокинетики и биораспределения CBL0100 в плазме крови и органах и тканях морских свинок 89
3.5.1 Исследование связывания с клеточными компонентами крови 89
3.5.2 Исследование фармакокинетики CBL0100 в плазме крови 89
3.5.3 Исследование биораспределения CBL0100 в органах и тканях
4. Обсуждение 94
5. Выводы 107
6. Практические рекомендации 108
7. Список литературы 109
8. Благодарности
