Введение
Обзор литературы 8
1. Ретротранспозон copia Drosophila mefanogaster 13
1.1 Особенности строения и транскрипции 13
1.2 Механизм транспозиции ретротранспозона copia 18
2. Молекулярные механизмы регуляции активности copia 21
2.1 Исследование регуляторных последовательностей МЭ с помощью трансгенных конструкций 22
2.1.1 Однокомпонентные вектора на основе Р-элемента 22
2.1.2 Система векторов GAL4/UAS 24
2.1.3 Система векторов FLP/FRT 27
2.1.4 Тетрациклин-зависимая система 28
2.1.5 Система векторов Cre/loxP и FLP/FRT 30
2.1.6 Репортерные гены, используемые в векторах при изучении D. melanogaster 32
2.2 Регуляторные области ретротранспозона copia 35
2.3 Геномные факторы, взаимодействующие с регуляторными элементами copia 39
3. Влияние МЭ на приспособленность 47
Материалы и методы 53
4.1 Основные растворы 53
4.2 Лабораторные линии, использованные в работе 53
4.3 Определение индекса конкуренции 56
4.4 Определение выживаемости яиц 57
4.5 Р-зависимая трансформация эмбрионов 58
4.5.1 Оборудование для инъекций 58
4.5.2 Получение и анализ трансформантов 59
4.5.3 Сбор эмбрионов после инъекций 60
4.6 Репортерные конструкции, использованные в работе 61
4.7 Гистохимическая окраска органов на активность р-галактозидазы 63
4.8 Количественное определение активности /?-галактозидазы 63
4.9 Молекулярно-биологические методы 65
4.9.1 Выделение геномной ДНК D. mefanogaster. 65
4.9.2 Выделение плазмидной ДНК 66
4.9.3 Ферментативная обработка ДНК 66
4.9.4 Гель-электрофорез фрагментов ДНК 66
4.9.5 Трансформация бактериальных клеток 67
4.9.6 Саузерн-блот гибридизация 68
4.9.6.1 Перенос ДНК из агарозных гелей на нейлоновый фильтр Hybond N 68
4.9.6.2 Мечение ДНК методом рассеянной затравки 68
4.9.6.3 Гибридизация с меченым зондом 69
4.10 Определение сайтов локализации МЭ на хромосомах 70
4.10.1 Приготовление давленых препаратов политенных хромосом слюнных желез D. melanogaster. 70
4.10.2 Приготовление ДНК зондов, меченых биотином 70
4.10.3 Проведение гибридизации in situ 71
4.11 Оценка числа копий и частоты транспозиций МЭ в геноме 72
4.11.1 Оценка гаплоидного числа копий 72
4.11.2 Измерение частоты транспозиций МЭ 73
4.12 Обработка результатов 74
Результаты и обсуждение 75
5.1 Регуляторные последовательности ретротранспозона copia 75
5.2 Влияние числа копий ретротранспозона copia на приспособленность ... 101
5.2.1 Изменение частоты транспозиций, числа копий сор/а и приспособленности особей в инбредных сублиниях линии 2Ь 102
5.2.1.1 Изменение числа копий copia 103
5.2.1.2 Изменение паттерна сайтов локализации copia 109
5.2.1.3 Изменение приспособленности в условиях инбридинга и ослабленной селекции в линиях с различной частотой транспозиций copia 111
5.2.3 Число копий ретротранспозонов и приспособленность в линиях 2Ь 112
Выводы 119
Список литературы
