Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Биоминерализация и биосилификация в живых системах 10
1.2. Губки и спикулы 14
1.3. Силикатеины и катепсины 18
1.4. Экспрессионные системы 31
1.5. Кристаллы кремния 38
1.6. Фитосинтез наночастиц металлов 41
2. Материалы и методы 44
2.1. Губки 44
2.2. Получение амплифицированой кДНК 44
2.3. Получение генетических конструкций использованных в работе 44
2.4. Получение бинарного вектора для трансформации растений 47
2.5. Растения, использованные в работе 48
2.6. Среды для культивирования стерильных растений и клеточных культур48
2.7. Получение и культивирование клеточных культур табака
2.7.1 Получение стерильных растений табака 50
2.7.2 Получение клеточных культур
2.8. Агробактериальная трансформация 51
2.9. Выделение РНК
2.10. Обратная транскрипция 53
2.11. Доказательство трансгенности 53
2.12. Полимеразная цепная реакция 54
2.13. Секвенирование 56
2.14. Детекция флуоресценции GFP методом конфокальной микроскопии... 56
2.15. Экстракция белков 56
2.16. SELDI 56
2.17. Перенос растений в почву 57
2.18. Получение и анализ наночастиц серебра 57
2.19. Выделение белка из бактерий и тест каталитической активности рекомбинантного силикатеина и катепсина 58
3. Результаты и обсуждение 60
3.1. Определение уровней экспрессии силикатеина и катепсина роговой губки L. oparinae 60
3.2. Генетические конструкции несущие ген LoSilA1, LoSilA1-EGFP, LoCath 62
3.3. Кристаллы кремния и состав кристаллов (полимеризация кремния in vitro) 64
3.4. Получение трансгенных каллусных линий, регенерация перенос трансгенных растений в почву.. 70
3.5. Влияние силикатеина на процессы фитосинтеза наночастиц серебра 76
Заключение 80
Выводы 83
Список сокращений
