Введение
ГЛАВА 1. Литературный обзор 9
1.1. Ненативные состояния белков в живой клетке 9
1.2. Заряженная поверхность мембраны как денатурирующий агент in vivo 12
1.3. Белки и мембраны. Возможные пути взаимодействия 14
1.4. Водно-спиртовые смеси как модель влияния поля мембраны на структуру белков 22
1.5. Пространственная структура и функции миоглобина 23
1.6. Структура и свойства цитохрома b5 26
1.7. Краткая характеристика структуры а-лактальбумина 29
1.8. Заключение 29
ГЛАВА 2. Материалы и методы 31
2.1. Приготовление растворов 31
2.2. Методы исследования третичной структуры
2.2.1. Абсорбционная спектроскопия 34
2.2.2. Флуоресцентная спектроскопия 35
2.2.3. Круговой дихроизм в ближней УФ области 36
2.2.4. Спектроскопия ЯМР высокого разрешения 37
2.2.5. Сканирующая микрокалориметрия 39
2.3. Методы изучения вторичной структуры
2.3.1. Круговой дихроизм в дальней УФ области 40
2.4. Методы исследования взаимодействия белков с мембраной
2.4.1. Высокоэффективная жидкостная гель-хроматография 41
2.4.2. Макроскопическая диффузия 41
2.4.3. Ограниченный протеолиз 42
ГЛАВА 3. Исследование миоглобина 44
3.1. Фосфолипидные везикулы вызывают нарушение третичной структуры миоглобина 45
3.2. Вторичная структура миоглобина в присутствии фосфолипидных везикул сохраняется 56
3.3. Денатурация миоглобина, вызываемая фосфолипидными везикулами, приводит к взаимодействию белка с их поверхностью.. 60
3.4. Стабильность миоглобина в присутствии фосфолипидных везикул.. 68
3.5. Фосфолипидные везикулы облегчают автоокисление оксимиоглобина 74
ГЛАВА 4. Изучение водорастворимого фрагмента цитохрома 77
4.1. Особенности нарушения нативных взаимодействий в третичной структуре цитохрома bj в присутствии фосфолипидных везикул 77
4.2. Сохранение вторичной структуры цитохрома bs в присутствии фосфолипидных везикул 88
4.3. Взаимодействие цитохрома Ь5 с фосфолипидными везикулами 90
4.4. Денатурирующее действие везикул из смеси фосфолипидов на цитохром эффективнее, чем из ненасыщенных отрицательно заряженных фосфолипидов 93
ГЛАВА 5. Сопоставление конформационного состояния различных белков в присутствии везикул и в водно-спиртовых смесях 96
5.1. Конформационные изменения а-лактальбумина в присутствии фосфолипидных везикул 96
5.2. Сопоставление структурных особенностей различных белков в присутствии фосфолипидных везикул 100
5.3. Сравнительная оценка конформационного состояния различных белков в присутствии фосфолипидных везикул и в водно-спиртовых смесях 103
Заключение 109
Выводы 112
Список литературы 113
