Введение
Глава 1. Изучение молекулярных нарушений в тканях предстательной железы человека при опухолевой трансформации 10
1.1 Общие характеристики злокачественных опухолей предстательной железы и основные тенденции в их биохимических исследованиях 10
1.2. Протеомные исследования тканей и клеток предстательной железы человека в норме и при опухолевой трансформации 14
1.2.1. Возникновение системного анализа белков как продуктов генной экпрессии. Исследования белков предстательной железы человека в догеномныи период (до 1989 г.) 14
1.2.2. Исследования белков предстательной железы человека в геномный период (1989 - 2001 гг.) 18
1.2.3. Исследования белков предстательной железы человека в постгеномную эру (с 2001 г.) 22
1.3. Молекулярно-генетические исследования предстательной железы человека при опухолевой трансформации 33
1.4. Поиски молекулярных маркеров рака предстательной железы с использованием постгеномных технологий 37
1.5. Исследования полиморфизма некоторых актин-связывающих белков при раке предстательной железы человека 44
Глава 2. Материалы и методы 52
2.1. Реактивы и биологические материалы 52
2.1.1. Реактивы 52
2.1.2. Биологические материалы 52
2.2. Подготовка образцов для проведения электрофоретических исследований . 53
2.3. Фракционирование белков одномерным электрофорезом по Лэммли 54
2.4. Фракционирование белков двумерным электрофорезом 54
2.4.1. Изоэлектрофокусирование и неравновесное фокусирование в полиакри-ламидном геле в градиенте рН, сформированном амфолинами 54
2.4.2. Изоэлектрофокусирование в иммобилиновом градиенте рН 56
2.4.3. SDS-электрофорез в пластинах полиакриламидного геля 56
2.5. Детекция белков на гелевых пластинах. Дениситометрия одномерных и двумерных электрофореграмм. Компьютерный анализ результатов. Хранение гелевых пластин 57
2.6. Иммуноблоттинг 58
2.7. Масс-спектрометрическая идентификация белков 59
2.8. Определение концентрации белков 60
2.9. Методы получения препаратов ДНК и формирования ДНК-коллекций 60
2.10. Метод дискриминации аллелей с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени для исследования однонуклеотидных полиморфизмов ДНК 61
2.11. Статистическая обработка результатов 63
Глава 3. Полученные результаты и их обсуждение 64
3.1. Исследование белкового состава тканей предстательной железы человека с помощью протеомных технологий 64
3.1.1. Формирование обобщенной двумерной карты белков простаты 64
3.1.2. Масс-спектрометрическая идентификация белков предстательной железы на двумерной карте. Различия белковых паттернов образцов с раком и доброкачественной гиперплазией 70
3.2. Изучение изменчивости белков в тканях предстательной железы человека 82
3.2.1. Изоформы актин-связывающих белков в тканях предстательной железы . 82
3.2.2. Полиморфизм ПСА в тканях предстательной железы 85
3.2.3. Полиморфизм енолазы 1 в тканях предстательной железы 87
3.2.4. Уточнение «конфликтных» определений аминокислотных последовательностей идентифицированных белков предстательной железы 89
3.2.5. Пилотное исследование однонуклеотидных полиморфизмов в некоторых генах, экспрессирующихся в тканях предстательной железы 93
3.3. Изучение специфичности и возможностей клинического использования потенциальных белковых маркеров рака предстательной железы человека 95
3.4. Формирование макетной версии компьютерной базы данных о «мажорных» белках предстательной железы человека 99
Заключение 105
Выводы 107
Список литературы 108
Приложение благодарности
