Список сокращений ....................................................................................................................... 4
Введение ......................................................................................................................................... 6
Глава 1. Обзор литературы ......................................................................................................... 11
1.1 Фотопревращения флуоресцентных белков .................................................................... 12
1.1.1. Фотоактивируемые флуоресцентные белки ........................................................... 13
1.1.2. Фотоконвертируемые флуоресцентные белки ....................................................... 14
1.1.3 Фотопереключаемые флуоресцентные белки .......................................................... 23
1.1.4. Бифотохромные флуоресцентные белки ................................................................. 26
1.2. Роль а.о. цистеина в фолдинге и созревании флуоресцентных белков ....................... 34
1.3. Хромопротеины ................................................................................................................ 35
1.4. Возгорающиеся красные флуоресцентные белки. ......................................................... 36
1.5. FRET-пары флуоресцентных белков .............................................................................. 37
1.6. Апоптоз .............................................................................................................................. 40
1.6.1. Внешний путь ............................................................................................................ 42
1.6.2. Внутренний путь ........................................................................................................ 43
1.6.3. ЭР стресс-индуцированный путь ............................................................................. 44
1.6.4 Субстраты каспазы 3 .................................................................................................. 45
1.7. Созревание ФБ в клетках млекопитающих .................................................................... 47
Глава 2. Материалы и методы .................................................................................................... 51
2.1 Материалы .......................................................................................................................... 51
2.2 Общие методики ................................................................................................................ 54
2.3 Хроматографические методы ........................................................................................... 63
2.4 Спектральные методы ....................................................................................................... 66
Глава 3. Результаты и обсуждение ............................................................................................ 71
3.1 Подбор оптимального хромопротеина в качестве акцептора во FRET-паре ............... 71
3.2 Получение бесцистеинового варианта SAASoti для работы в окислительных условиях
клетки ........................................................................................................................................ 77
3.3 Получение варианта moxSAASoti с яркой и стабильной красной формой ................. 87
3.4 Улучшение созревания moxSAASoti при 37°С ............................................................... 93
3.5 Объединение замен путем случайного одновременного мутагенеза ......................... 100
3.6 Анализ сенсора moxSAASoti F97M/H74K -23-Ultramarine in vitro .................................... 104
3.7 Кристаллизация moxSAASoti F97M in cellulo .............................................................. 108
Заключение ................................................................................................................................. 116
Выводы ....................................................................................................................................... 117
Список опубликованных работ по теме диссертации ............................................................ 118
Список использованной литературы ....................................................................................... 120
