Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 14
1.1. Общая характеристика карбоксилаз 14
1.2. Эндоэргические реакции карбоксилирования, катализируемые карбоксилазами первого типа 17
1.2.1. Структура и механизм действия карбамоилфосфатсинтетаз 18
1.3. Экзоэргическое карбоксилирование 22
1.3.1. Структура и механизм действия рибулозобисфосфат- карбоксилаз/оксигеназ 22
1.4. Общая характеристика биосинтеза пуриновых нуклеотидов de novo и АИР-карбоксилаз, участвующих в этом биосинтезе 29
1.4.1. Явление С02-стимуляции ..32
1.5. Химический синтез субстратов АИР-карбоксилазы и их аналогов 34
1.6. Изучение обратимой реакции неферментативного карбоксилирования ..37
1.7. Сравнительная характеристика АИР-карбоксилаз бактерий, грибов и высших эукариот 41
1.7.1. Ферменты бактерий 42
1.7.2. Ферменты архебактерий 46
1.7.3. Ферменты грибов 47
1.7.4. Ферменты высших эукариот 49
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 53
2.1. Приборы 53
2.2. Реактивы 53
2.3. Методы исследования 55
2.3.1. Спектрофотометрические методы 55
2.3.2. Использование спектроскопии ЯМР !Н для изучения реакции
обратимого превращения АИР -> КАИР 59
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 61
3.1. Химический синтез субстратов АИР-карбоксилазы 61
3.2. Характеристика АИР-карбоксилазы дрожжей Saccharomyces
cerevisiae и САИКАР-синтетазы-АИР-карбоксилазы человека 64
3.3. Изучение кинетики неферментативного декарбоксилирования 5-амино-4 карбоксиимидазолриботида и 5-амино-4-карбокси-1- метилимидазола с помощью УФ- и Н-ЯМР-спектроскопии 67
3.4. Изучение кинетики неферментативного карбоксилирования 5-амино-имидазолриботида и аминометилимидазола с помощью УФ-спектроскопии...71
3.5. Изучение кинетики ферментативного декарбоксилирования 5-амино-4 карбоксиимидазолриботида с помощью УФ- и ЯМР Н-спектроскопии 75
3.6. Изучение кинетики ферментативного карбоксилирования 5-аминоимидазолриботида с помощью УФ- и ЯМР Н-спектроскопии 77
3.7. Исследование мутантных и модифицированных форм АИР-карбоксилазы дрожжей 87
3.8. Эволюция фермента АИР-карбоксилазы 88
ВЫВОДЫ ...92
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 93
ПРИЛОЖЕНИЕ 1 104
