Введение
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
1. БИОХИМИЯ ОКИСЛЕНИЯ МЕТАНА 9
1.1. Энергетический обмен метанокисляющих микроорганизмов 10
1.1.1. Окисление метана II
1.1.2. Окисление метанола 19
1.1.3. Окисление формальдегида 21
1.1.4. Окисление формиата 24
1.2. Электронног-транспортные системы 26
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 34
2.1. Объект исследования 34
2.2. Получение бесклеточных препаратов 34
2.3. Электронная микроскопия 36
2.4. Определение активности ММО 37
2.5. Очистка цитохрома CQQ . . 38
2.6. Аналитические методы 40
2.7. Спектральные методы 41
2.8. Определение аминокислотного состава .... 42
3. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МЕТАНООКСИГЕНАЗЫ 43
3.1. Введение 43
3.2. Разработка методов определения активности метанмонооксигеназы по убыли субстрата с помощью газожидкостной хроматографии ... 45
3.3. Радиоизотопный метод определения активности метанмонооксигеназы 51
3.4. Краткое заключение 56
4. ИССЛЕДОВАНИЕ СВОЙСТВ МЕТАШОНООКСИГЕНАЗЫ В БЕСКЛЕТОЧНЫХ ПРЕПАРАТАХ 57
4.1. Введение 57
4.2. Внутриклеточная локализация 58
4.3. Стабильность метанмонооксигеназы в
бее клеточных препаратах и условия их
хранения 61
4.4. Условия, необходимые для протекания метанмонооксигеназной реакции 63
4.5. рН-зависимость метанмонооксигеназы .... 65
4.6. Влияние ингибиторов 67
4.7. Субстратная специфичность метанмонооксигеназы 69
4.8. Краткое заключение 75
5. ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ ЦИТОХРОМА Ссо В МЕТАНМОНО
ОКСИГЕНАЗНОЙ РЕАКЦИИ MC.CAPSUC.ATUS ШТАММ М. . 76
5.1. Введение 76
5.2. Солюбилизация метанмонооксигеназы .... 77
5.3. Выделение и очистка цитохрома CQQ .... 78
5.4. Молекулярная характеристика цитохрома CQQ. 81
5.5. Спектральные характеристики цитохрома CQQ. 81
5.6. Аминокислотный состав цитохрома CQQ ... 83
5.7. Взаимодействие цитохрома CQQ С СО, СН^ . .
и СН3С1 89
5.8. Изучение роли цитохрома CQQ В метанмонооксигеназной реакции 93
5.9. Краткое заключение 96
6. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМ МЕТАНМОНООКСИГЕНАЗНОЙ
РЕАКЦИИ КИНЕТИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ 99
6.1. Введение 99
6.2. Дейтероизотопныи эффект метанмоно-оксигеназной реакции 99
6.3. Температурная зависимость метанмоно-оксигеназной реакции 104
6.4. Краткое заключение 108
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 114
ВЫВОДА 121
ЛИТЕРАТУРА 123
