Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Влияние глюкокортикоидов на процесс программируемой клеточной гибели путем апоптоза в развивающемся головном мозге 12
1.1. Апоптоз — один из ключевых процессов формирования организма. Его значимость и молекулярные основы 12
1.1.1. Реализация апоптоза на молекулярном уровне. Основные семейства белков 13
1.1.1.1. Семейство каспаз 14
1.1.1.2. Семейство Bcl-2-подобных белков 15
1.1.1.3. Основные молекулярные пути запуска апоптоза 18
1.2. Апоптоз в развивающейся ЦНС 21
1.2.1. Значимость апоптоза в нормальном развитии ЦНС 21
1.2.2. Роль апоптоза при гипоксическом поражении развивающегося мозга...22
1.2.3. Значение экспрессии генов ключевых белков апоптоза в развитии ЦНС25
1.3. Глюкокортикоиды: их роль в развитии ЦНС и регуляции программируемой гибели клеток 28
1.3.1. Влияние глюкокортикоидов на развитие организма и ЦНС 31
1.3.2. Гипоксия и глюкокортикоиды 33
1.3.3. Глюкокортикоиды и апоптоз 35
1.3.3.1. Эффекты глюкокортикоидов на апоптоз в периферических тканях 36
1.1.1.3. Влияние глюкокортикоидов на апоптоз в головном мозге 37
ГЛАВА 2. Материалы и методы 42
2.1. Животные 42
2.2. Препараты и реактивы 42
2.3. Экспериментальные воздействия 42
2.3.1. Острое введение гидрокортизона 42
2.3.2. Однократное введение дексаметазона на 3 день жизни и последующий эпизод острой гипоксии через 4 часа после инъекции 43
2.4. Выделение образцов ткани мозга. 43
2.5. Выделение РНК 44
2.6. Оценка уровней мРНК Bcl-XL, Вах и каспазы-3 методом ОТ-ПЦР 44
2.7. Выделение суммарного белка и его разделение посредством одномерного денатурирующего гель-электрофореза 47
2.8. Оценка уровней белков Bcl-XL, Вах и каспазы-3 методом иммуноблота 48
2.9. Выделение ДНК 48
2.10. Анализ фрагментации ДНК 50
2.11. Оценка двигательной активности неонатальных крысят 50
2.12. Статистический анализ данных 51
ГЛАВА 3. Результаты 53
3.1. Уровень фрагментации ДНК и экспрессия генов апоптоза Bcl-XL, Вах и каспазы-3 в коре, стволе мозга, гиппокампе и мозжечке неонатальных крыс 53
3.2. Влияние глюкокортикоидов и гипоксии на массу тела, мозга и надпочечников крыс в неонатальном периоде развития 59
3.2.1. Масса тела, головного мозга и надпочечников через 6 часов после введения гидрокортизона 59
3.2.2. Масса тела, мозга и надпочечников неонатальных животных после однократного введения дексаметазона на 3 день жизни 61
3.2.3. Масса тела, масса мозга и надпочечников неонатальных животных после кратковременного 10-минутного эпизода гипоксии 63
33. Эффекты глюкокортикоидов на уровни мРНК и белка Bcl-XL, Вах, каспазы-3 и на
фрагментацию ДНК в неонатальном головном мозге крыс 63
3.3.1. Эффекты гидрокортизона на уровни мРНК и белка Bcl-XL, Вах и каспазы-3
через 6 часов после инъекции 64
3.3.1.1. Гиппокамп и кора головного мозга 64
3.3.1.2. Ствол головного мозга 70
3.3.1 J. Мозжечок 70
3.3.2. Эффекты гидрокортизона на степень фрагментации ДНК через 6 часов после инъекции 70
3.3.3. Уровни мРНК и белка Bcl-XL, Вах и каспазы-3 в головном мозге 8-дневных животных после однократной инъекции дексаметазона на 3 день жизни и последующего эпизода острой гипоксии 73
3.4. Разработка автоматического метода количественной оценки уровня двигательной активности неонатальных животных 81
3.5. Эффекты глюкокортикоидов и кратковременного эпизода гипоксии на уровень двигательной активности неонатальных животных 89
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 91
выводы 107
список литературы 108
