Введение
Глава 1. Современные взгляды о патогенезе органофосфатных периферических нейропатий и подходах к их коррекции векторными генетическими конструкциями (обзор литературы) 15
1.1 Роль и место периферических нейропатий при поражении фосфорорганическими соединениями 16
1.2 Представления о патогенезе органофосфатных периферических нейропатий 21
1.2.1 Органофосфатные периферические нейропатии как реализация нехолинергических эффектов фосфорорганических соединений 21
1.2.2 Роль нейротоксической эстеразы в формировании органофосфатных периферических нейропатий 22
1.3 Моделирование органофосфатных периферических нейропатий в опытах на животных 25
1.4 Подходы к применению геннотерапевтических средств для предупреждения развития органофосфатных периферических нейропатий 30
Глава 2. Материалы и методы исследований 38
2.1 Общая характеристика экспериментального материала 38
2.2 Схема проведения экспериментов 39
2.3 Выбор фармакологических препаратов для терапии токсических нейропатий у крыс после подострого отравления малатионом 40
2.4 Описание методов исследования 41
2.4.1 Изучение общего состояния животных 41
2.4.2 Количественная оценка внешних проявлений нейропатии 42
2.4.3 Методика оценки «силы хватки» 43
2.4.4 Исследование нейромышечной проводимости 45
2.4.5 Исследование тактильной чувствительности 46
2.4.6 Исследование ориентировочно-исследовательской активности 46
2.4.7 Описание режима электропорации для введения плазмидной ДНК 47
2.4.8 Подготовка проб биоматериала для проведения биохимических и генетических исследований 48
2.4.9 Определение активности холинэстераз 49
2.4.10 Проведение полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 50
2.4.11 Получение комплементарной ДНК и проведение количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 50
2.4.12 Определение фармакокинетических свойств плазмидной ДНК 52
2.5 Методы статистической обработки результатов исследований 53
Глава 3. Результаты собственных исследований 54
3.1 Разработка экспериментальной модели токсической нейропатии, индуцированной малатионом, для оценки эффективности геннотерапевтических средств 54
3.1.1 Определение показателей токсичности и кумулятивных свойств малатиона 54
3.1.2 Изучение особенностей нервно-мышечной проводимости на модели острой и подострой интоксикации крыс малатионом 60
3.1.3 Исследование угнетения активности холинэстеразы в различных биосубстратах после острого и подострого отравления малатионом 65
3.2.1 Исследование эффективности курсового применения нейротропных препаратов для предупреждения развития токсических нейропатий при подостром отравлении малатионом 68
3.2.2 Исследование эффективности курсового применения геннотерапевтических средств для предупреждения развития токсических нейропатий при отравлении малатионом 74
3.2.3 Сравнительный анализ эффективности курсового применения ипидакрина и РПД NGF 79
3.3 Исследование подходов к повышению уровня трансфекции плазмидной ДНК на модели подострого отравления крыс малатионом 83
3.3.1 Оптимизация температуры отжига при проведении полимеразной цепной реакции с ДНК плазмид 83
3.3.2 Обоснование выбора режима элетропорации для трансфекции образца рекомбинантной плазмидной ДНК, кодирующей фактор роста нервов 87
3.3.3 Исследование фармакокинетики рекомбинантной плазмидной ДНК, кодирующей фактор роста нервов при внутримышечном введении и с использованием метода электропорации 89
3.3.4 Исследование относительного уровня экспрессии и наработки специфического белка после внутримышечного введения и внутримышечного введения с использованием метода электропорации рекомбинантной плазмидной ДНК, кодирующей наработку фактора роста нервов 94
3.3.5 Исследование эффективности рекомбинантной плазмидной ДНК, кодирующей наработку фактора роста нервов при внутримышечном введении с использованием электропорации на модели экспериментальной нейропатии 96
Заключение 98
Выводы 110
Практические рекомендации 111
Список сокращений и условных обозначений 113
Список литературы 114
