Введение
Глава 1. Генетические особенности, определяющие различие эффектов воздействия этанола на организм, (обзор литературы) 15
1.1. Основные типы эффектов и поражений, которые возникают при острой и хронической интоксикации 15
1.2. Молекулярно-генетические маркеры, определяющие индивидуальные особенности организма при воздействии этанолом 22
1.2.1. ДНК-полиморфизм, гаплотипы и гаплогруппы 22
1.2.2. Эпигенетические особенности 31
1.2.3. Количество копий гена 34
1.2.4. Экспрессия генов 35
1.3. Генетические особенности ГАМК-ергической системы, определяющие индивидуальный ответ при действии этанола на организм 40
Глава 2. Материалы и методы исследования 51
2.1. Животные и их содержание 51
2.2. Характеристика токсического агента 52
2.3. Определение токсикометрических параметров этанола 52
2.4. Схемы моделирования поражения этанолом 52
2.5. Общая схема проведения исследования 53
2.6. Методы оценки острой токсичности этанолом 56
2.7. Методы отбора образцов крови и тканей лабораторных животных 58
2.8. Выделение геномной ДНК из крови лабораторных крыс 59
2.9. Проведение полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 60
2.10. Выделение РНК 61
2.10.1. Выделение РНК из тканей крыс 61
2.10.2. Выделение РНК из крови крыс 62
2.11. Получение комплементарной ДНК 63
2.12. Электрофоретическая детекция комплементарной ДНК 63
2.13. Проведение количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 64
2.14. Методика оценки относительного уровня экспрессии генов Gabra1, Gabra2, Gabra3, Gabra4, Gabra5, Gabra6, Gabrb1 65
2.15. Методы статистической обработки результатов исследований 66
Глава 3. Изучение профиля экспрессии генов, кодирующих отдельные субъединицы гамка-рецептора, при острой и хронической интоксикации этанолом 67
3.1. Определение токсикометрического параметра этанола у исследуемых животных 67
3.2. Экспериментальная оценка выраженности острого отравления этанолом у животных 69
3.3. Изучение влияния острой и хронической интоксикации этанолом на профиль (уровень) экспресии генов Gabra1, Gabra2, Gabra3, Gabra4, Gabra5, Gabra6 и Gabrb1 в образцах тканей лабораторных животных 72
3.4. Выявление связи уровня экспрессии генов, кодирующих отдельные субъединицы ГАМКА-рецептора, со степенью депримирующего действия этанола 83
3.4.1. Выявление связи уровня экспрессии генов Gabra1, Gabra2, Gabra3, Gabra4, Gabra5 и Gabrb1 со степенью депримирующего действия этанола на модели острой интоксикации этанолом крыс 83
3.4.2. Выявление связи уровня экспрессии генов Gabra1, Gabra2, Gabra3, Gabra4, Gabra5 и Gabrb1 со степенью депримирующего действия этанола на модели острой интоксикации этанолом предварительно алкоголизированных крыс 87
Глава 4. Экспериментальное исследование влияния полиморфизмов генов, кодирующих отдельные субъединицы гамка-рецептора, на тяжесть угнетения ЦНС 91
4.1. Выявление аллельных вариантов генов Gabra1, Gabra2, Gabra3, Gabra4, Gabra5, Gabra6 и Gabrb1 у белых беспородных крыс для установления их ассоциации с глубиной депримирющего воздействия этанола на нервную систему 91
4.2. Изучение зависимости уровня экспрессии генов Gabra1, Gabra2, Gabra3, Gabra4 и Gabrb1 от генотипа крыс 97
4.3. Влияние полиморфизмов генов Gabra1, Gabra2, Gabra3, Gabra4 и Gabrb1 на степень депримирующего действия этанола при острой интоксикации животных 109
4.3.1. Анализ полиморфизма генов Gabra1, Gabra2, Gabra3, Gabra4 и Gabrb1 на модели острой интоксикации этанолом крыс 109
4.3.2. Анализ полиморфизма генов Gabra1, Gabra2, Gabra3, Gabra4 и Gabrb1 на модели острой интоксикации этанолом предварительно алкоголизированных крыс 119
Заключение 130
Выводы 140
Практические рекомендации 142
Словарь терминов 143
Список сокращений 145
Список литературы 149
Приложение А .173
