Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1 Выделение и культивирование МСК 11
1.2. Иммунофенотипическая характеристика МСК 15
1.3. Проявления функциональной активности МСК по отношению к Т-лимфоцитам 21
1.4. Проявления функциональной активности МСК по отношению к В-лимфоцитам 27
1.5. Проявления функциональной активности МСК при аллерген-специфических реакциях лейкоцитов 30
1.6. Изменение функционального состояния МСК при их взаимодействии с компонентами иммунной системы 32
Глава 2. Материалы и методы 37
2.1. Получение и культивирование МСК 37
2.2. Культивирование В-клеточных линий 38
2.3. Дифференцировка МСК 39
2.4. Морфологическая характеристика МСК 39
2.5. Определение пролиферативной активности МСК 40
2.6. Иммунофенотипирование культур МСК 40
2.7. Получение и активация клеток мононуклеарной фракции крови 40
2.8. Выделение популяции В-лимфоцитов 41
2.9. Сокультивирование МСК и клеток мононуклеарной фракции периферической крови 2.10. Сокультивирование МСК и клеток линий Namalva либо U266 42
2.11. Оценка пролиферации лимфоцитов 42
2.12. Иммунофенотипирование лимфоцитов 43
2.13. Иммуноферментный анализ 44
2.14. Оценка уровня продукции иммуноглобулинов 44
2.15. Иммунофлуоресцентная микроскопия 45
2.16. Статистическая обработка результатов 46
Глава 3. Результаты
3.1. Особенности получения МСК из пупочного канатика 47
3.2. Сравнение свойств МСК, культивируемых в нормоксии или в гипоксии 49
3.3. Ростовые характеристики и дифференцировка МСК 55
3.4. Иммунофенотип МСК 58
3.5. Проявления функциональной активности МСК при сокультивировании с лимфоидными клетками 65
3.5.1. Изучение влияния МСК на Т-лимфоциты 65
3.5.1.1. Влияние МСК на активацию Т-лимфоцитов 66
3.5.1.2. Влияние МСК на пролиферацию Т-лимфоцитов 68
3.5.2. Изучение влияния МСК на В-лимфоциты 69
3.5.2.1. Влияние МСК на пролиферацию В-лимфоцитов 69
3.5.2.2. Тестирование функциональной активности МСК на лимфобластоидных и миеломных клетках 73
3.5.3. Влияние МСК на аллерген-специфические реакции лейкоцитов при атопической гиперчувствительности 75
3.6. Влияние клеток мононуклеарной фракции и лимфоцитарных митогенов на функциональное состояние МСК 82
3.6.1. Экспрессия Toll-подобных рецепторов на мембране МСК 82
3.6.2. Локализация транскрипционного фактора NF-B в МСК при действии лимфоцитарных митогенов или при сокультивировании с лимфоидными клетками 84
Глава 4. Обсуждение 99 Выводы 127
Благодарности 128
Список литературы 129
