Введение
Обзор литературы 10
1.1. Толстые нити 10
1.1.1. Парамиозин 10
1.1.2. Миозин 12
1.1.3. Миород 15
1.1.4. Твитчин 19
1.2. Тонкие нити 22
1.2.1. Актин 22
1.2.2. Тропомиозин 23
1.2.3. Тропонин 27
1.2.4. Кальпонин 29
1.2.5. Устройство тонких нитей 32
1.3. Регуляция запирательных мышц 34
1.3.1. Актин-ассоциированная Са2+-регуляторная система 34
1.3.2. Ca2+-регуляция тонких нитей и запирательный тонус 39
1.4. Возможные механизмы запирательного сокращения 40
1.4.1. «Мостиковая» гипотеза запирательного тонуса 41
1.4.2. «Парамиозиновая» гипотеза запирательного тонуса 42
1.4.3. «Твитчиновая» гипотеза запирательного тонуса 43
1.4.4. «Миородовая» гипотеза запирательного тонуса 45
1.4.5. «Кальпониновая» гипотеза запирательного тонуса 45
2.Материалы и методы 48
2.1. Материалы 48
2.1.1. Выделение сократительных белков из скелетных мышц кролика 48
2.1.1.1. Выделение миозина скелетных мышц кролика 48
2.1.1.2. Выделение актина скелетных мышц кролика 49
2.1.1.3. Выделение тропомиозина скелетных мышц кролика 50
2.1.2. Выделение сократительных белков из запирательной мышцы мидии з
2.1.2.1. Выделение тонких нитей запирательной мышцы мидии 51
2.1.2.2. Выделение «миофибрилл» запирательной мышцы мидии 51
2.1.2.3. Выделение миозина запирательной мышцы мидии 52
2.1.2.4. Выделение «природного» актина запирательной мышцы мидии. 53
2.1.2.5. Выделение тропомиозина запирательной мышцы мидии 54
2.1.2.6. Выделение фракции тонких нитей мидии, придающей Ca2+-чувствительность синтетическому актомиозину 55
2.1.2.7. Получение актин-связывающих белков ABP-19, ABP-20 и ABP-28 56
2.2. Методы 57
2.2.1. Иммуноферментный анализ 57
2.2.2. Масс-спектрометрия 58
2.2.3. Формирование актомиозиновых моделей 59
2.2.4. Определение Mg2+-АТФазной активности актомиозиновых моделей 59
2.2.5. ДСН-электрофорез в полиакриламидном геле 60
2.2.6. Денситометрия 62
2.2.7. Определение концентрации белков методом биурета 65
3.Результаты 66
3.1. Тонкие нити мидии содержат минорные белки, придающие Ca2+ чувствительность реконструированному актомиозин-тропомиозину 67
3.1.1. Идентификация компонентов, придающих Ca2+-чувствительность тонким нитям мидии 67
3.1.2. Содержание тропонин-тропомиозинового комплекса в тонких нитях мидии 71
3.1.3. Происходят ли потери тропонина в процессе выделения тонких нитей мидии? 72
3.1.4. Зависимость степени Ca2+-регуляции реконструированного актомиозин-тропомиозина от содержания в нем реконструированного тропонина 74
3.1.5. Тонкие нити мидии содержат фактор, ингибирующий активирование ими миозина кролика, но не миозина мидии 75
3.1.6. Тропомиозин мидии ингибирует Mg2+-ATФазную активность актомиозина кролика, но не актомиозина мидии 77
3.1.7. Гибридные и негибридные актомиозиновые модели, реконструированные из актина, миозина и тропомиозина скелетной и запирательной мышцы 80
4.Обсуждение 83
4.1. Тонконитевая регуляция запирательных мышц двустворчатых моллюсков 83
4.2. Идентификация тропониновой регуляции в тонких нитях запирательной мышцы мидии 83
4.3. Использование гибридных актомиозиновых моделей для изучения запирательных мышц двустворчатых моллюсков 86
4.4. Распространение тропониновой регуляции среди двустворчатых моллюсков 87
Заключение 91
Выводы 93
Список литературы 94
