Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 9
1.1. Латеральный проточный иммуноанализ 9
1.1.1. Строение тест-полоски 9
1.1.2. Форматы проведения ЛПИА 10
1.1.3. Основные компоненты тест-полосок для ЛПИА
1.1.3.1. Аналитическая мембрана 12
1.1.3.2. Мембрана для нанесения образца 17
1.1.3.3. Мембрана для нанесения конъюгата 18
1.1.3.4. Абсорбирующая (впитывающая) мембрана 19
1.1.4. Теоретические основы ЛПИА 19
1.1.4.1. Капиллярные явления 19
1.1.4.2. Взаимодействие антиген-антитело
1.1.5. Антитела в ЛПИА 25
1.1.6. Метки, применяемые в ЛПИА
1.1.6.1. Латексные частицы 25
1.1.6.2. Коллоидное золото 25
1.1.6.3. Флуоресцентные метки 28
1.1.6.4. Квантовые точки 28
1.1.6.5. Парамагнитные частицы 30
1.1.6.6. Ферментные метки 31
1.1.6.7. Углеродные наночастицы 31
1.2. Иммунофильтрационный анализ
1.2.1. Принцип метода 33
1.2.2. Метки в ИФиА 35
1.2.3. Мембраны в ИФиА 36
1.3. Физиологическая роль ПГ и методы его определения 39
1.3.1. Роль ПГ в организме коров 39
1.3.2. Методы определения ПГ для выявления стельности коров
1.3.2.1. Радиоиммунологический анализ 44
1.3.2.2. Иммуноферментный анализ 45
1.3.2.3. Флуоресцентный иммуноанализ 48
1.3.2.4. Биосенсоры для определения ПГ 49
1.3.2.5. Быстрые методы определения ПГ 52
ГЛАВА II. Экспериментальная часть 56
2.1. Материалы и методы исследования
2.1.1. Химические реагенты, материалы и биологические препараты 56
2.1.2. Оборудование 57
2.1.3. Методы исследования 58
ГЛАВА III. Результаты и обсуждение 64
3.1. Разработка ЛПИА для определения ПГ 64
3.1.1. Получение наночастиц золота и конъюгата ПГ-ОВА, меченного золотыми
наночастицами 65
3.1.1.1. Получение и характеристика наночастиц золота 65
3.1.1.2. Получение ПГ-ОВА, меченного наночастицами золота 66
3.1.1.3. Выбор оптимального pH и концентрации конъюгата ПГ-ОВА 66
3.1.2. Оптимизация условий проведения ЛПИА с использованием наночастиц золота для определения ПГ 68
3.1.2.1. Выбор концентраций реагентов 69
3.1.2.2. Выбор схемы проведения анализа 71
3.1.3. Оптимизация условий проведения ЛПИФА для определения ПГ 75
3.1.3.1. Изучение условий регистрации аналитического сигнала 75
3.1.3.2. Варианты проведения анализа 77
3.1.3.3. Выбор концентраций реагентов 77
3.1.3.4. Оптимизация условий нанесения конъюгата ПГ-ПХ на мембрану для конъюгата 79
3.1.3.5. Выбор способа нанесения реагентов 81
3.1.3.6. Выбор схемы проведения анализа 83
3.1.3.7. Оптимизация стадии окрашивания тест-полоски 84
3.1.3.8. Выбор мембранных компонентов для создания тест-полоски 86
3.1.3.9. Влияние содержания белков на проведение анализа 92
3.1.3.10. Практическое использование метода ЛПИФА для анализа ПГ в молоке с целью определения стельности 95
3.2. Разработка метода ИФиА для определения ПГ 98
3.2.1. Оптимизация условий проведения ИФиА ПГ с коллоидным золотом в качестве метки 99
3.2.1.1. Выбор концентраций реагентов 99
3.2.2. Разработка метода ИФиА с ферментной меткой 102
3.2.2.1. Выбор концентраций реагентов 103
3.2.2.2. Определение оптимальных характеристик регистрации протекания субстратной реакции на мембранах 105
3.2.2.3. Оптимизация метода ИФиА ПГ с ферментной меткой 107
3.2.2.4. Выбор аналитической мембраны 110
3.2.2.5. Влияние содержания белков в образце на проведение анализа 112
3.2.2.6. Апробация ИФиА ПГ на реальных образцах молока 113
3.2.2.7. Сравнение метода ИФиА ПГ с традиционным методом ИФА 115
3.2.2.8. Сравнение метода ИФиА с ферментной меткой с методами ЛПИФА и методом ИФА 117
Выводы 119
Список литературы
