Введение
ГЛАВА 1. Методы анализа каталитической активности цитохромов Р450 (Обзор литературы) 11
1.1. Молекулярная организация цитохром Р450-зависимой монооксигеназной системы 11
1.2. Цитохром Р450-зависимый метаболизм лекарственных препаратов 16
1.3. Цитохром Р450 как молекулярная мишень для действия противоопухолевых лекарственных препаратов 18
1.4. Активация молекулярного кислорода цитохром Р450-зависимыми
системами и роль защитной антиоксидантной системы организма 24
1.5. Методы анализа субстрат-ингибиторного потенциала цитохрома Р450 29
1.5.1. Спектральные методы исследования цитохрома Р450 29
1.5.1.1. Абсорбционная спектроскопия 30
1.5.1.2. Флуоресцентная спектроскопия 32
1.5.1.3. Спектроскопия электронного парамагнитного резонанса 34
1.5.1.4. Спектроскопия ядерного магнитного резонанса 35
1.5.1.5. Рамановская спектроскопия 36
1.5.1.6. Мёссбауэровская спектроскопия 37
1.5.1.7. Рентгеновская спектроскопия
1.5.2. Хроматографические/хромато-масс-спектрометрические методы 39
1.5.3. Метод поверхностного плазмонного резонанса 40
1.5.4. Метод атомно-силовой микроскопии 41
1.5.5. Молекулярно-генетические методы 42
1.5.6. Электрохимические методы исследования цитохрома Р450 43
1.5.7. Заключение 68
ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1. Реактивы 71
2.2. Оборудование 75
2.3. Методики исследований 76
2.3.1. Синтез коллоидного раствора золота (золотых наночастиц), стабилизированного ДДАБ 76
2.3.2. Приготовление суспензии многостеночных углеродных нанотрубок (МУНТ) 77
2.3.3. Приготовление модифицированных ферментных электродов 77
2.3.4. Приготовление и иммобилизация CYP3А4 с цитохромом b5 78
2.3.5. Циклическая и квадратно-волновая вольтамперометрия 78
2.3.6. Определение электрокаталитической активности изоферментов цитохрома Р450 в режиме амперометрии 78
2.3.7. Определение пероксидазной активности CYP3A4 81
2.3.8. Определение пероксида водорода, образующегося в процессе электрокаталитической реакции 82
2.3.9. Спектральные исследования цитохрома Р450 82
2.3.10. Определение общей антиоксидантной активности 82
ГЛАВА 3. Результаты и их обсуждение 84
3.1. Разработка электрохимических систем для анализа каталитической активности клинически значимых изоферментов цитохрома Р450 84
3.1.1. Электрохимические характеристики иммобилизованных изоферментов цитохрома Р450
3.1.2. Электрокаталитическая активность иммобилизованных изоферментов цитохрома Р450 94
3.1.3. Электрохимический анализ ингибиторной активности оксазолиновых производных [17(20)E]-прегнена по отношению к CYP17A1 102
3.1.4. Электрохимический анализ влияния антиоксидантных метаболических препаратов на каталитическую активность CYP3A4 и CYP2C9 111
3.2. Исследование влияния цитохрома b5 на электрокаталитическую активность CYP3A4 122
3.3. Электрохимические системы на основе бактериальных изоферментов цитохрома Р450 127
3.3.1. Электрохимическая система на основе бактериальной С19 стероид-гидроксилазы (CYP260A1) 128
3.3.2. Электрохимические системы на основе бактериальных изоферментов цитохромов P450 семейства CYP109 136
Заключение 146
Выводы 148
Список сокращений и условных обозначений 149
Список литературы 155
