Введение
2. Литературный обзор 11
2.1. Выбор хроматографического метода для количественного определения аминокислот 11
2.2. Выбор условий для разделения АК в тонких слоях силикагеля 17
2.3. Окрашивание хроматограмм 26
2.4. Количественная обработка результатов методом денситометрии 30
2.4.1. Инструментальные способы измерения 34
2.4.2. Количественная оценка результатов измерений 38
2.4.3. Анализ ошибок в тонкослойной хроматографии 41
2.5. Валидация хроматографических методов анализа 43
2.5.1 Предвалидационные тесты в планарной хроматографии 43
2.5.2. Валидация различных типов аналитических (включая фармакопейные) методов 44
2.5.3. GLP в тонкослойной хроматографии 48
3. Техника и методика проведения эксперимента 51
3.1. Приборы и материалы 51
3.2. Реактивы 52
3.3. Приготовление растворов стандартных образцов аминокислот, проб плазмы крови и пробКЖ 53
3.5. Подготовка хроматографических пластинок 54
3.5. Хроматографические системы, используемые в работе и их приготовление 55
3.6. Подготовка хроматографической камеры 55
3.7. Приготовление раствора нингидринового реактива 56
3.8. Нанесение стандартных образцов (Sp S5), проб нативной сыворотки крови (Ni-NN) и проб КЖ (Ui-U\j) на хроматографическую пластинку 56
3.9. Проявление хроматограмм 57
3.10. Обработка хроматограммы нингидриновым реактивом 57
3.11. Количественная обработка хроматограмм 58
3.12. Определение аминокислот методом ВЭЖХ 58
3.13. Выделение неизвестного вещества, имеющего хроматографическую подвижность и УФ-спектр, аналогичные фенилаланину из лейцин-содержащей КЖ с помощью колоночной хроматографии 59
3.14. Регистрация ЯМР^Н спектров 60
4. Обсуждение результатов 61
4.1. Хроматографический комплекс для количественной высокоэффективной тонкослойной хроматографии 61
4.1.1. Разработка состава слоя для пластин тонкослойной хроматографии 61
4.1.2. Оборудование для высокоэффективной тонкослойной хроматографии..64
4.1.3. Компьютерный видеоденситометр «ДенСкан» для количественной высокоэффективной тонкослойной хроматографии: состав прибора, программное обеспечение 70
5. Количественная высокоэффективная тонкослойная хроматография аминокислот 86
5.1. Выбор метода нанесения обнаруживающего реагента на хроматограмму для визуализации пятен аминокислот 88
5.2. Выбор оптимальных условий проведения цветной реакции для визуализации пятен аминокислот на хроматограммах 90
5.3. Прямое разделение многокомпонентных смесей аминокислот сочетанием методов двухмерной и одномерной тонкослойной хроматографии 95
5.4. Анализ аминокислот в биологических жидкостях 98
5.5. Анализ аминокислот в культуральных жидкостях 102
5.5.1. Анализ оксиаминокислот серина, гомосерина и треонина, а также сопутствующих им в КЖ аминокислот 102
5.5.2. Анализ гомосерина и сопутствующих аминокислот в КЖ штамма-продуцента гомосерина 108
5.5.3. Количественное определение треонина и сопутствующих ему в КЖ аминокислот 113
5.6. Количественное определение ароматических аминокислот - триптофана и фенилаланина в образцах КЖ 116
5.6.1. Разработка методов количественного определения триптофана 116
5.6.2. Анализ фенилаланина в культуральных жидкостях 121
5.7. Анализ основных аминокислот - лизина, аргинина и орнитина в промышленных образцах КЖ 125
5.7.1. Применение методов хроматоденситометрии и ВЭЖХ для определения содержания лизина в КЖ ;.., 125
5.7.2. Количественное определение аргинина, орнитина и сопутствующих им аминокислот в КЖ штамма -продуцента аргинина 127
5.8. Количественное определение неполярных аминокислот - валина и лейцина в КЖ штамма-продуцента валина 131
5.8.1. Анализ валина и сопутствующих ему в КЖ аминокислот 131
5.8.2. Количественный анализ лейцина и сопутствующих ему соединений в КЖ штамма-продуцента лейцина 135
5.9. Основания Шиффа - один из возможных источников потерь при биосинтезе промышленных аминокислот 143
5.10. Анализ отходов производства аминокислот 145
6. Выводы 147
7. Литература 149
