Введение
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ . 10
Глава I. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ мРНК С РИБОСОМОЙ 10
1. Связывание мРНК в инициаторном комплексе . 11
2. Взаимодействие мРНК с рибосомными белками во время элонгации : 20
Глава II. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ тРНК С 30S СУБЧАСТИЦЕЙ .: 36
Глава III. МЕХАНИЗМ ОТБОРА аа-тРНК 48
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ : 60
Глава I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 6 0
1. Использованные реактивы и материалы . 60
2. Выделение суммарного белка субчастиц и рибосомы Е.аоЪг 62
.3. Выделение рибосомного белка S1 . 63
:4. Изолирование тРНК Е.ооїг . 63
5. фосфорилирование тРНК е и тРНкУ . 64
6. Выделение препарата аминоацил-тРНК--синтетазы ,
7. Иммобилизация полинуклеотидов на гидразидагарозе .
8. Аффинная хроматография рибосомных белков на колонках с иммобилизованными поли-нуклеотидами
:9. Аффинная хроматография тРНК на колонках с и преформированными мРНК -белковыми
комплексами
10. Видовой анализ тРНК, связанной с и мРНК -белковыми комплексами 69
11. Равновесное связывание тРНК на преформи- и рованном мРНК -белковом комплексе и определение константы диссоциации образующегося комплекса 70
12. Определение распределения мРНК -белкового
комплекса в пределе колонки с
мРНК-агарозой .: 71
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 73
1. Результаты иммобилизации полинуклеотидов . 73
2. Аффинная хроматография СБ70 на колонках
с иммобилизованными полинуклеотидами 74
3. Связывание тРНК на колонках с и преформированными мРНК -белковыми
комплексами . 84
:3..1. Связывание тРНК на мРНКИ-СБ70 комплексы 84
3.2. Анализ тРНК/ связанной на колонках с иммобилизованными полинуклеотидами
без рибосомных белков 88
3.3. Селекция деацилированной и амино-ацилированной тРНК на колонках с преформированным мРНК -СБ70 комплексом 90
3.4. Связывание деацилированной тРНК на и преформированные мРНК -СБ30 и
мРНКИ-СБ50 комплексы 91
:4. Равновесное связывание тРНК на преформированном мРНК -белковом комплексе и определение константы диссоциации образующегося комплекса 93
:4.1. Определение константы диссоциации (мРНКИ-СБ30)-тРНК комплекса 93
:4.2. Определение константы диссоциации (мРНКи-Б13)-тРНК комплекса 97
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 101
1. Аффинная хроматография СБ70 на колонках с иммобилизованными полинуклеотидами 101
2. Связывание тРНК на колонках с преформированными мРНК -белковыми комплексами 105
2.1. Связывание тРНК на мРНКи-СБ70 комплексах. 1 05
2.:2. Связывание тРНК на мРНКи-СБ30 и мРНКи-СБ50 комплексах 108
2.3. Связывание тРНК на MPHK-S4, -S9 и -S13 комплексах 111
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ 115
ЛИТЕРАТУРА 116
