Введение
Глава 1. Литературный обзор 10
1.1. Структура клеточной стенки растения 10
1.2. Рост клеток растяжением. Теория «кислого роста» 11
1.3. Участие фитогормонов в регуляции клеточного растяжения 13
1.4. Транскрипционные факторы и белки с OSR-доменом, 17 участвующие в регуляции клеточного растяжения
1.5. Роль эндоглюканаз в регуляции клеточного растяжения 19
1.6. Участие ксилоглюканэндотрансгликозолаз / гидролаз в 21 регуляции клеточного растяжения
1.7. Гидроксильный радикал и его роль в клеточном растяжении 23
1.8. Роль экспансинов в обеспечении роста клеток растяжением 1.8.1. Характеристика структурных особенностей экспансинов 24
1.8.2. Эволюция экспансинов 27
1.8.3. Механизм действия экспансинов на клеточные стенки 29
1.8.4. Влияние экспансинов на размеры органов растений 31
1.8.5. Роль экспансинов в развитии клеток древесного волокна 35
1.8.6. Влияние экспансинов на адаптацию растений к абиотическим стрессам
Глава 2. Материалы и методы исследования 41
2.1. Объекты исследования 41
2.2. Выделение и очистка тотальной ДНК растений 41
2.3. Выделение и очистка плазмидной ДНК 42
2.4. Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами 44
2.5. Аналитический гель-электорофорез ДНК 45
2.6 Препаративный гель-электорофорез ДНК 45
2.7. Элюция ДНК из агарозных гелей
2.8. Полимеразная цепная реакция 47
2.9. Подготовка компетентных клеток Е. coli 50
2.10. Трансформация компетентных клеток E.coli плазмидной ДНК 50
2.11. Автоматическое секвенирование ДНК ферментативным 51 методом
2.12. Подготовка электрокомпетентных клеток Е. coli и 52 Agrobacterium tumefaciens
2A3. Электропорация компетентных клеток Е. coli и Agrobacterium 53
tumefaciens
2.14. Агробактериальная трансформация листовых дисков табака 55
2.15. Выделение РНК и построение кДНК 57
2.16. Количественная ОТ-ПЦР в режиме реального времени 58
2.17. Стерилизация и выращивание семян трансгенных растений 58 табака на селективной среде
2.18. Морфологический анализ трансгенных растений 59
2.19. Экзогенная обработка растений табака фитогормонами 59
2.20. Определение плоидности трансгенных растений 60
2.21. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей 60
2.22. Статистическая обработка полученных результатов 61
2.23. Реактивы и материалы 61
2.24. Составы использованных стандартных растворов 63
Глава 3. Результаты и обсуждение 64
3.1. Гены экспансинов табака (Nicotiana tabacum) 64
3.1.1. Родство генов экспансинов табака с экспансинами других 64 растений
3.1.2. Роль генов экспансинов NtEXPAl и ШЕХРА4 в регуляции 66 клеточного растяжения при росте органов табака
3.1.2.1. Влияние экзогенных фитогормонов на изменение уровня 68 транскрипции генов экспансинов табака
3.1.2.2. Влияние индуцибельной экспрессии гена ARGOS-LIKE на изменение уровня транскрипции экспансинов табака
3.1.2.3. Конститутивная экспрессия гена NtEXPAl 74
3.1.3. Конститутивная экспрессия гена ШЕХРА5 в трансгенных растениях табака
3.1.4. Конститутивная и индуцибельная экспрессия гена ШЕХРА6 88
3.1.4.1. Создание трансгенных растений табака, с повышенной экспрессией г&н&№ЕХРА6
3.2. Конститутивная экспрессия гена AtEXPAlO A. thaliana в трансгенных растениях табака
3.2.1. Амплификация и клонирование гена AtEXPAl0 101
3.2.2. Получение трансгенных растений табака с повышенной 103 экспрессией гена AtEXPAl 0
3.2.3. Морфологический анализ трансгенных растений табака с 107 повышенной экспрессией гена AtEXPAl 0
3.3. Клонирование и исследование генов экспансинов тополя 113
черного (Populus nigra L.)
3.3.1. Конститутивная экспрессия гена РпЕХРА 1 114
3.3.1.1. Амплификация и клонирование гена PnEXPAl 114
3.3.1.2. Получение трансгенных растений с конститутивной экспрессией гена PnEXPAl
3.3.1.3. Морфологический анализ трансгенных растений с конститутивной экспрессией гена PnEXPAl
3.3.2. Конститутивная экспрессия гена РпЕХРАЗ 125
3.3.2.1. Амплификация и клонирование гена РпЕХРАЗ 125
3.3.2.2. Получение трансгенных растений с конститутивной экспрессией гена РпЕХРАЗ
3.3.2.3. Морфологический анализ трансгенных растений с конститутивной экспрессией гена РпЕХРАЗ
Заключение 137
Выводы 139
Список литературы
