Введение
1. Обзор литературы 12
1.1 Генно-инженерные векторы, используемые при создании кандидатных вакцин 12
1.1.1 Типы генно-инженерных векторов 12
1.1.2. Вирусные векторы, используемые для создания кандидатных генно-инженерных вакцин 13
1.1.3 Генно-инженерные векторы на основе аденовирусов 16
1.1.3.1 Структурно-функциональная характеристика аденовирусов человека 16
1.1.3.2 Векторы на основе генома аденовируса человека 19
1.1.3.3 Структурные особенности аденовируса птиц CELO 24
1.1.3.4 Векторы на основе генома аденовируса птиц CELO 28
1.2 Вакцинно-профилактика инфекций, вызываемых вирусом гриппа птиц и вирусом болезни Марека 31
1.2.1. Вакцины, используемые для предупреждения инфекции вируса гриппа птиц 31
1.2.2. Вакцины, используемые для предупреждения инфекции ВБМ...ЗЗ
1.2.3 Необходимость использования генно-инженерных вакцин при инфекциях вируса гриппа птиц и вируса болезни Марека 36
1.2.4. Кандидатные генно-инженерные вакцины против вируса гриппа птиц, полученные на основе вирусных векторов 40
1.2.5. Кандидатные генно-инженерные вакцины против ВБМ, полученные на основе вирусных векторов 44
2. Собственные исследования 48
2.1 Материалы и методы 48
2.1.1 Материалы 48
2.1.2. Методы 51
2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 65
2.2.1 Клонирование генов гликопротеинов gB, gE и gl из генома ВБМ и гена гемагглютинина из генома вируса гриппа H5N2 65
2.2.1.1 Клонирование генов гликопротеинов gB, gE и gl из генома ВБМ методом ПЦР 65
2.2.1.2 Клонирование полноразмерного гена гемагглютинина из генома вируса гриппа типа H5N2 методом ОТ-ПЦР 68
2.2.2 Конструирование рекомбинантных аденовирусов на основе генома CELO, несущих гены гликопротеинов gB, gE и gl ВБМ и ген гемагглютинина вируса гриппа птиц Н5 69
2.2.3 Изучение экспрессии генов гликопротеинов gB, gE и gl ВБМ и гена гемагглютинина вируса гриппа птиц рекомбинантными аденовирусами в экспериментах in vitro 73
2.2.3.1 Анализ экспрессии генов гликопротеинов ВБМ в культуре клеток, заражённых рекомбинантными аденовирусами, методом ОТ-ПЦР 73
2.2.3.2 Определение экспрессии гликопротеина gB ВБМ вирусом CELO-gB методом иммуноблоттинга в культуре заражённых клеток 75
2.2.3.3 Определение экспрессии гемагглютинина вируса гриппа птиц методом иммуноблоттинга в культуре клеток, зараженных рекомбинантным аденовирусом CELO-HA 76
2.2.3.4. Определение экспрессии гена гемагглютинина НА вируса гриппа птиц штамма Н5 методом ИФА 78
2.2.4 Генетическая иммунизация рекомбинантными аденовирусами 79
2.2.4.1 Определение иммуногенности рекомбинантного гликопротеина gB ВБМ, экспрессируемого CELO-gB на цыплятах 79
2.2.4.2 Определение иммуногенности рекомбинантного гемагглютинина, экспрессируемого CELO-HA методом РТГА 82
2.2.5 Определение протективности рекомбинантного гемагглютинина, экспрессируемого CELO-HA, на лабораторных животных 83
2.2.5.1 Определение оптимального способа иммунизации мышей линии BALB/c рекомбинантным CELO-HA 83
2.2.5.2 Анализ протективности НА-специфического иммунного ответа мышей, иммунизированных рекомбинантным аденовирусом CELO-HA, с последующим заражением летальной дозой вируса гриппа птиц H5N2 86
3. Обсуждение результатов 89
Выводы 101
Список используемой литературы 102
