Введение
ГЛАВА 1. ОКСИДАТИВНЫИ СТРЕСС. АНТИОКСИДАНТНАЯ ЗАЩИТА. МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ПОЛУЧЕНИЮ РЕКОМБИНАНТНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ АНТИОКСИДАНТНОГО ДЕЙСТВИЯ 10
1.1. Свободные радикалы. Определение, классификация и механизмы образования 10
1.2. Физиологическое значение свободных радикалов 12
1.3. Патофизиологические эффекты свободных радикалов.Оксидативный стресс как типовой патологический процесс. Система антиоксидантной защиты организма 13
1.4. TNF- d и Си,гп-супероксиддисмутаза 17
1.5. Супероксиддисмутаза-структура, биохимия. Супероксиддисмутаза как антиоксидант 20
1.6. Возможности терапевтического применения препаратов супероксиддисмутазы 25
1.7. Принципы получения рекомбинантных препаратов 27
1.8. Принципы промышленного культивирования 30
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 32
2.1. Лабораторный метод очистки рекомбинантной супроксиддисмутазы ... 32
2.1.1. Метод получения белкового дезинтеграта 32
2.1.2. Метод ионообменной хроматографии 32
2.1.3. Диализ (обессоливание) 33
2.1.4. Метод гель-хроматографии 33
2.1.5. Определение белка по методу Лоури 34
2.1.6. Количественный метод определения активности супроксиддисмутазы 34
2.2. Подготовка материала для проведения модельных опытов и исследований групп пациентов 36
2.3. Оценка параметров свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы 37
2.3.1. Определение конечных продуктов ПОЛ (ТБК-АП) 37
2.3.2. Определение окисленного и восстановленного глутатиона в эритроцитах периферической крови человека 38
2.3.3. Определение активности супероксиддисмутазы набором "Randox" в нейтрофилах и мононуклеарах 39
2.3.4. Определение активности каталазы 39
2.3.5. Определение окислительной деструкции белков 39
2.4. Методы оценки иммунного статуса 40
2.4.1. Индукция синтеза цитокинов. Определение фактора некроза опухоли - a (TNF - а) 40
2.4.2. ИФА метод определения TNF- а 40
2.5. Методы оценки биохимических параметров 41
2.5.1. Метод определения АЛТ 41
2.5.2. Метод определения общего билирубина 41
2.5.3. Метод определения ГГТП 41
2.5.4. Метод определения щелочной фосфатазы 42
2.5.5. Метод определения холинэстеразы 42
2.6. Характеристика обследованных больных 42
2.7. Статистические методы 43
2.8. Характеристика используемых реактивов и оборудования 43
ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 45
3.1. Действие препарата рексод в модельных системах на окислительную деструкцию белков 47
3.2. Модифицирование метода определения активности супероксиддисмутазы в эритроцитах для нейтрофилов и мононуклеаров
периферической крови 49
4
3.3. Действие экзогенной супероксиддисмутазы на активность эндогенной супероксиддисмутазы в опытах in vitro 54
3.4. Изучение влияния экзогенной СОД на продукцию фактора некроза опухоли а (TNF-а), фактора воспаления обладающего цитотоксичностью в отношении клеток мишеней, в системах с добавлением экзогенной супероксиддисмутазы 56
3.5. Оценка клинико-лабораторных параметров у больных с острым гепатитом В до и после лечения препаратом Рексод 59
3.6. Влияние препарата рексод на параметры свободнорадикального статуса и антиоксидантной защиты у пациентов с хроническим течением патологического процесса (возрастная макулодистрофия или сенильная неэксуда-
тивная хориоретинальная дистрофия) 71
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 75
ВЫВОДЫ 78
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 79
