Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1 Строение и функции глутаматергического синапса .12
1.2 Структурно-молекулярная организация рецепторов глутамата 14
1.2.1 АМПА/KA–ионотропные рецепторы глутамата 17
1.2.2 NMDA-чувствительные ионотропные рецепторы глутамата 20
1.2.3 Метаботропные рецепторы глутамата .25
1.3 Нейротоксическое действие глутамата 28
1.4 Глутамат-индуцированная дисрегуляция кальциевого баланса клетки 30
1.5 Рецепторы глутамата в периферической нервной системе 34
1.6 Гомоцистеин, как эндогенный агонист рецепторов глутамата 36
Глава 2. Объект и методики .39
2.1. Приготовление первичных культур нейронов 39
2.1.1. Первичная культура нейронов коры головного мозга крыс 40
2.1.2. Первичная культура нейронов тригеминального ганглия крыс 42
2.2. Идентификация нейронов и глиальных клеток в культурах 43
2.2.1. Идентификация клеток в первичной культуре коры головного мозга крыс .43
2.2.2. Идентификация клеток в первичной культуре тригеминального ганглия крыс 45
2.3. Флуориметрическая регистрация внутриклеточного Ca2+ 46
2.4. Флуориметрическое определение митохондриального мембранного потенциала .48
2.5. Регистрация токов нейронов методом локальной фиксации потенциала ...49
2.6. Определение апоптотических и некротических клеток путем последовательного окрашивания акридиновым оранжевым и бромистым этидием 50
2.7. Порядок проведения экспериментов 51
2.8. Обработка данных .53
Глава 3. Результаты 55
3.1. Исследование состава рецепторов глутамата, обеспечивающих вход Са2+ при действии агонистов рецепторов глутамата в нейронах первичной культуры коры мозга крыс 55
3.1.1 Внутриклеточные Са2+ ответы и токи в нейронах при действии
агонистов рецепторов глутамата NMDA и АМПА/KA типа 55
3.1.2. Зависимость внутриклеточных Са2+ ответов нейронов от Са2+ внеклеточного раствора 57
3.1.3. Вклад NMDA рецепторов различного субъединичного состава в генерацию внутриклеточного Са2+ сигнала 58
3.1.4. Вклад АМПА рецепторов различного субъединичного состава в генерацию внутриклеточного Са2+ сигнала и интегральных токов... 60
3.2. Исследование нейротоксического эффекта гомоцистеина на нейроны первичной культуры коры мозга крыс 63
3.2.1. Нейротоксический эффект долговременного действия гомоцистеина 63
3.2.2. Внутрикелеточные Са2+ ответы при кратковременном и долговременном действии гомоцистеина 65
3.2.3. Интегральные токи, вызванные гомоцистеином 67
3.3. Исследование нейротоксического эффекта гомоцистеина на нейроны первичной культуры тригеминального ганглия крыс 69
3.3.1. Внутриклеточные Са2+ ответы при действии гомоцистеина 69
3.3.2. Интегральные токи, вызванные гомоцистеином .72
3.3.3. Нейротоксический эффект долговременного действия гомоцистеина 73
3.4. Сравнительная характеристика ответов нейронов коры и тригеминального ганглия крыс на гомоцистеин, NMDA и глутамат 75
3.4.1. Внутриклеточные Са2+ ответы .75
3.4.2. Митохондриальный мембранный потенциал 78
Глава 4. Обсуждение 83
Выводы 93
Список литературы 95
