Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1. Фагоцитарное звено свободнорадикального гомеостаза крови 14
1.2. Свободнорадикальные реакции с участием гемоглобина 28
1.3. Липидные гидропероксиды и методы их определения 34
1.4. Сывороточный альбумин человека как участник свободнорадикальных реакций 41
1.5. Свободнорадикальный гомеостаз и его нарушения 53
1.5.1. Роль свободных радикалов в жизнедеятельности клетки 53
1.5.2. Оксидативный стресс 57
1.5.3. Карбонильный стресс 58
1.5.4. Нитрозативный/нитрозирующий стресс 61
1.5.5. Редуктивный стресс 63
1.6. Диагностика нарушений свободнорадикального гомеостаза 65
Глава 2. Пациенты, материалы и методы исследования 68
2.1. Пациенты 68
2.2. Материалы и реактивы 72
2.3. Оборудование 74
2.4. Программное обеспечение 75
2.5. Методики 75
Глава 3. Нейтрофилы крови как источник свободных радикалов 78
3.1. Разработка метода анализа радикал-продуцирующей активности нейтрофилов крови 78
3.1.1. Эффект двухстадийной стимуляции на радикал-продуцирующую активность нейтрофилов крови 78
3.1.2. Использование различных хемилюминесцентных зондов в параллельных измерениях 3.1.3. Деконволюция хемилюминограммы на квадратично-экспоненциальные функции 90
3.2. Механизм развития быстрой и медленной фМЛФ-индуцированной вспышки 91
3.3. Изучение фенотипа нейтрофилов при стимуляции ФМА 93
3.4. Изучение действия других стимулов 99
3.5. Применение метода оценки радикал-продуцирующей функции фагоцитов крови для целей клинического лабораторного анализа 102
3.5.1. Пратически здоровые доноры 102
3.5.2. Ожоговая болезнь 103
3.5.3. Сахарный диабет II типа 109
3.5.4. АНЦА-ассоциированные системные васкулиты 110
3.5.5. Системная красная волчанка 112
3.5.6. Беременные и пациентки с угрозой прерывания беременности 113
3.5.7. Миелодиспластический синдром 116
Глава 4. Определение липидных гидропероксидов 119
4.1. Определение липидных гидропероксидов методом ИК-спектроскопии 119
4.2. Определение липидных гидропероксидов методом активированной хемилюминесценции 125
4.2.1. Модельная аналитическая система на основе соевого лецитина 125
4.2.2. Хемилюминесцентное определение липидных гидропероксидов в системе субстрат Fe(II)-кумарин С-525 127
4.2.3. Определение липидных гидропероксидов в системе микропероксидаза – изолюминол 129
4.2.4. Определение липидных гидропероксидов в фолликулярной жидкости и мембранах клеток 132
Глава 5. Гемоглобин как липидный прооксидант 133
5.1. Взаимодействие гемоглобина с липидами и фосфолипидами 133
5.2. Прооксидантная активность гемоглобина по отношению к липидам 135
Глава 6. Альбумин как мишень свободных радикалов 140
6.1. Альбумин как мишень действия ультрафиолетового излучения 140
6.1.1. Изменение антиоксидантных и флуоресцентных свойств тирозина, триптофана и альбумина под действием УФ-облучения 141
6.1.2. Карбонилирование под действием ультрафиолетового излучения 145
6.1.3. Изменение связывающих свойств альбумина под действием ультрафиолета 146
6.1.4. Ишемически модифицированный альбумин: роль окислительной модификации 148
6.1.5. Изменение дзета-потенциала альбумина под действием ультрафиолета 149
6.1.6. Влияние ультрафиолетового излучения на флуоресценцию глобулинов 150
6.2. Альбумин как мишень действия индукторов оксидативного стресса 151
6.2.1. Окислительная модификация альбумина под действием ультразвука 151
6.2.2. Окислительная модификация альбумина под действием химических агентов 151
6.2.3. Окислительная модификация альбумина активированными нейтрофилами 152
6.3. Клиническое значение ДОА при некоторых патологиях 153
Глава 7. Оценка антиоксидантного профиля плазмы крови 157
7.1. Разработка методики 158
7.2. Антиоксидантный профиль плазмы при некоторых заболеваниях 164
7.2.1. Антиоксидантная емкость «сильной» фракции 164
7.2.1. Антиоксидантная емкость «средней» фракции 167
7.2.3. Прооксидантная емкость плазмы 168
7.3. Антиоксидантный профиль фолликулярной жидкости 169
7.4. Определение активности супероксиддисмутазы в плазме крови 172
Глава 8. Методология лабораторной оценки свободнорадикального гомеостаза крови 175
8.1. Круг решаемых клинических и аналитических задач 175
8.2. Разработанность аналитических процедур 177
8.3. Аналитическая надежность, информативность, экспрессность, стоимость 178
8.4. Референтные интервалы 180
8.5. Комплексность подхода и его клиническая информативность 181
Заключение 186
Выводы 192
Практические рекомендации 194
Список работ, опубликованных по теме диссертации 196
Публикации в журналах из списка ВАК 196
Тезисы докладов 199
Список литературы 203
