Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы .11
1.1 Антибиотики – определение, общее представление об их роли,
продуцентах и проблеме поиска новых веществ 11
1.2 Антибиотики, продуцируемые микроскопическими грибами 15
1.3 Грибы, образующие соединения с антимикотической активностью .22
1.4 Нерибосомальные антимикробные пептиды грибов с антифунгальной активностью и антибиотики на их основе 26
1.5 Подходы скрининга и идентификации грибных антибиотиков .45
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследований 56
2.1 Объекты 56
2.2 Методы исследований .58
2.2.1 Методы выделения чистых культур грибов 58
2.2.2 Оценка антимикотической активности микромицетов и первичный отбор штаммов 59
2.2.3 Проверка продукции штаммами антигрибных соединений в жидкой среде и вторичный отбор штаммов с высокой антибиотической активностью 60
2.2.3.1 Оценка антибиотической активности методом дисков .60
2.2.4 Молекулярно-генетическая идентификация выделенных штаммов, активных продуцентов антибиотических веществ 62
2.2.5 Определение спектра усваиваемых соединений активными продуцентами антимикотиков 64
2.2.6 Оптимизация выхода антибиотика для штамма Trichoderma сitrinoviride ВКПМ F-1228 .65
2.2.7 Выделение и изучение свойств антибиотических веществ, продуцируемых штаммом T. сitrinoviride ВКПМ F 1228 .67
2.2.8 Определние токсичности активной фракции штамма T.сitrinoviride ВКПМ F-1228 71
2.2.9 Определение цитотоксической активности активной фракции T. сitrinoviride ВКПМ F-1228 72
2.2.10 Обработка данных и повторности 73
ГЛАВА 3. Распространенность среди микроскопических грибов способности к образованию антимикотиков и отбор активных продуцентов .74
3.1 Общая оценка антимикотической активности грибных культур .74
3.2 Антимикотическая активность микроскопических грибов, выделенных из почв различных природных зон
3.3 Антимикотическая активность микроскопических грибов из разных экотопов 76
3.4 Антимикотическая активность микроскопических грибов различных таксонов отдела Ascomycota .79
ГЛАВА 4. Отбор активного продуцента антимикотиков
4.1 Оценка способности к синтезу антимикотиков у наиболее активных культур микромицетов в жидкой среде .84
4.2 Характеристика спектра антибиотической активности и утилизации соединений у отобранных штаммов рода Trichoderma
4.3 Оптимизация условий культивирования штамма T. citrinoviride ВКПМ F-1228 – продуцента антимикотических веществ 93
4.4 Оптимизация содержания С и N в среде для накопления антибиотиков T. citrinoviride ВКПМ F-1228 методом полнофакторного эксперимента .96
ГЛАВА 5. Выделение, идентификация и характеристика антибиотического комплекса T. сitrinoviride ВКПМ F-1228 .102
5.1. Спектр антимикробной активности экстрактов T. сitrinoviride ВКПМ F-1228 102
5.2 Очистка и разделение антибиотического комплекса и оценка токсичности T. сitrinoviride ВКПМ F-1228 10
4 5.3 Антимикробная активность пептаиболов T. citrinoviride ВКПМ
F-1228 110
Глава 6. Лабораторный регламент получения комплекса антимикотических веществ - пептаиболов из T. citrinoviride ВКПМ F 1228 114
6.1 Область применения .114
6.2 Характеристика препарата 114
6.3 Субстраты и материалы 115
6.4 Технология и экономические затраты на производство препарата в лабораторных условиях 117
6.4.1 Стадия подготовки .119
6.4.2 Ферментационная стадия .120
6.4.3 Стадия выделения и очистки .120
6.4.4 Побочные продукты .
6.5 Экономические затраты 124
6.6 Технические требования .125
6.7 Упаковка и маркировка .126
6.8 Требования безопасности .126
6.9 Приемка 1 6.10 Методы контроля .127
6.11 Хранение 130
Заключение .131
Выводы .134
Список используемой литературы .
