Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. а-Токоферол (а-ТФ) и особенности его действия 13
1.1.1. Структура, номенклатура, транспорт и локализация витамина Е... 13
1.1.2. Функции а-ТФ 15
1.1.2.1. Антиоксидантная роль токоферолов 16
1.1.2.1.1. Антиокислительные способности а-ТФ 17
1.1.2.1.2. Участие а-ТФ в регуляция пероксидного окисления липидов в биологических мембранах 22
1.1.2.2. Структурные и динамические особенности мембран и модификация их а-ТФ 26
1.2. Действие биологически активных веществ в сверхмалых дозах - новая область исследований 39
1.2.1. Общие закономерности действия биологически активных веществ в сверхмалых дозах и существующие теории, объясняющие их 41
1.2.1.1. Роль специфических (рецепторных) взаимодействий в механизме действия биологически активных веществ в сверхмалых дозах 48
1.2.1.2. Особенности структуры жидкой воды и их роль в механизме действия биологически активных веществ в сверхмалых дозах 53
1.2.2. Действие биологически активных веществ в сверхмалых дозах на биологические мембраны 62
Глава 2. Материалы и методы 70
2.1. Методика приготовления растворов а-ТФ в спирте и вазелиновом масле 70
2.2. Выделение мембран эндоплазматического ретикулума и плазматических мембран из клеток печени мышей 70
2.3. Определение концентрации белка в мембранах 72
2.4. Применение метода спинового зонда для изучения структурно-динамического состояния микросомальных и плазматических мембран ...72
2.4.1. Измерение вязкостных характеристик различных областей липидного бислоя мембран 74
2.4.2. Определение термоиндуцированных структурных переходов в липидном бислое мембран и расчет эффективной энергии их активации. 81
2.5. Статистическая обработка данных 84
2.5.1. Интервальные оценки распределения средних показателей 84
2.5.2. Сравнение двух средних показателей 86
2.5.2.1. /-Тест или Меритерий Стьюдента (параметрический критерий) 87
2.5.2.2. Критерий Уилкоксона (непараметрический критерий) 88
2.5.3. Корреляционный анализ 89
2.5.4. Сравнение двух стандартных отклонений (F-критерий Фишера)...90
2.5.5. Вычисление суммарной ошибки в определении эффекта 91
2.6. Использование инфракрасной спектроскопии для изучения структурно-динамического состояния водных растворов а-ТФ 92
2.6.1. Измерения флуктуации показателей пропускания тонких слоев водных растворов в средней части ИК-спектра 93
2.6.2. Использование расстояния Махаланобиса в качестве формального критерия происходящих в воде изменений 97
Глава 3. Экспериментальная часть и обсуждение результатов 99
3.1. Влияние а-ТФ на структурное состояние глубоколежащих областей микросомальных мембран клеток печени мышей in vitro 100
3.1.1. Изменение микровязкости глубоколежащих областей липидного бислоя микросомальных мембран под действием а-ТФ в широком диапазоне концентраций (104-10"25М) при температуре 293 К 100
3.1.2. Температурные зависимости тс и термоиндуцированные структурные переходы в глубоколежащих областях микросомальных мембран 104
3.1.3. Эффективная энергия активации термоиндуцированных структурных переходов в глубоколежащих областях липидов микросомальных мембран 113
3.2. Влияние а-ТФ на структурное состояние поверхностных областей микросомальных мембран клеток печени мышей in vitro 115
3.2.1. Изменение жесткости поверхностных областей липидного бислоя микросомальных мембран под действием а-ТФ в широком диапазоне концентраций (10"4-10"25М) при температуре 293 К 115
3.2.2. Температурные зависимости S и термоиндуцированные структурные переходы в поверхностных областях микросомальных мембран 119
3.3. Влияние а-ТФ на структурное состояние глубоколежащих областей плазматических мембран клеток печени мышей in vitro 128
3.3.1. Изменение микровязкости глубоколежащих областей липидного бислоя плазматических мембран под действием а-ТФ в широком диапазоне концентраций (\04-\025М) при температуре 293 К 129
3.3.2. Температурные зависимости тс и термоиндуцированные структурные переходы в глубоколежащих областях плазматических мембран 132
3.3.3. Эффективная энергия активации термоиндуцированных структурных переходов в глубоколежащих областях липидов плазматических мембран 138
3.4. Влияние а-ТФ на структурное состояние поверхностных областей плазматических мембран клеток печени мышей in vitro 140
3.4.1. Изменение жесткости поверхностных областей липидного бислоя плазматических мембран под действием а-ТФ в широком диапазоне концентраций (10"4-10"25М) при температуре 293 К 140
3.4.2. Температурные зависимости S и термоиндуцированные структурные переходы в поверхностных областях плазматических мембран 143
3.5. Роль полярности растворителя, в частности, воды в эффектах сверхнизких и «мнимых» концентраций а-ТФ 153
3.5.1. Сравнительное изучение эффекта полярных (водно-спиртовых) и неполярных (в вазелиновом масле) растворов а-ТФ на вязкостные свойства микросомальных мембран 153
3.5.2. Влияние а-ТФ в широком диапазоне концентраций (10"4-10"25М) на показатели ИК-спектра тонких слоев воды 159
Глава 4. Заключение 166
4.1. Особенности и возможные механизмы действия а-ТФ на структуру микросомальных и плазматических мембран в трех областях концентраций 166
4.1.1. Неспецифическое встраивание а-ТФ в мембрану как механизм его действия в «физиологических» концентрациях (ІСҐ-ІО"9 М) 167
4.1.2. Специфическое взаимодействие а-ТФ со связывающими центрами на мембране и инициирование образования микродоменных структур в ней в качестве возможных механизмов действия а-ТФ в СМД (109-10"18 М) 168
4.1.3. Роль полярных свойств растворителя (воды) в механизме действия «мнимых» концентраций а-ТФ (10"18-10"25М) 170
Выводы 174
Список литературы 176
