Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1 Vibrio parahaemolyticus и Vibrio alginolyticus – возбудители заболеваний человека 13
1.2 Факторы патогенности видов V. parahaemolyticus и V. alginolyticus 24
1.3 Формирование «пандемичных» клонов V. parahaemolyticus 31
1.4 Традиционные и современные методы идентификации и дифференциации V. parahaemolyticus и V. alginolyticus 34
Собственные исследования 38
Глава 2. Материалы и методы 38
2.1 Бактериальные штаммы 38
2.2 Питательные среды и культивирование 46
2.3 Определение фенотипических признаков 48
2.3.1 Биохимические тесты 48
2.3.2. Феномен Канагава 48
2.3.3 Определение уреазной активности 49
2.4 Серологическое типирование парагемолитических вибрионов 49
2.5 Метод фаготипирования галофильных вибрионов 50
2.6 Метод определения цитотоксической активности на культуре тканей 51
2.7 Методика постановки реакции гемолиза 52
2.8 ПЦР-анализ и праймеры 52
2.9 Полногеномное секвенирование 55
2.10 MALDIOF масс-спектрометрический анализ 55
2.11 Определение чувствительности/устойчивости к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом (ДДМ) 57
Глава 3. ПЦР и maldiof масс-спектрометрический анализ в идентификации и внутривидовой дифференциации v. parahaemolyticus и v. alginolyticus 59
3.1 Идентификация видов V. parahaemolyticus и V. alginolyticus традиционными
биохимическими методами 59
3.2 Межвидовая дифференциация V. parahaemolyticus и V. alginolyticus с помощью ПЦР тестирования на присутствие видоспецифичных генов 61
3.3 Меж- и внутривидовая дифференциация V. parahaemolyticus и V. alginolyticus
методом MALDIOF масс-спектрометрического анализа 65
3.4 Сравнительная оценка эффективности биохимического тестирования, ПЦР-анализа и
метода масс-спектрометрии для дифференциации V. parahaemolyticus и V. alginolyticus 71
Глава 4. Внутривидовая дифференциация парагемолитических вибрионов по признакам, сопряженным с патогенностью 76
4.1 Тестирование парагемолитических вибрионов по признакам, связанным с проявлением патогенности 76
4.2 Характеристика уреазопозитивных парагемолитических вибрионов и продукция ими гемолизина TRH in vitro 79
4.3 Разработка комплексного метода оценки вирулентности парагемолитических вибрионов 87
4.4 Биологическая активность штаммов V. parahaemolyticus в отношении культур клеток позвоночных 92
Глава 5. Гено- и фенотипическая характеристика коллекционных галофильных вибрионов 95
5.1 Изучение штаммов V. parahaemolyticus и V. alginolyticus, выделенныхв Приморском крае при вспышке в 2012 году и спорадических случаях в 2013-2012 годах 95
5.2 Анализ свойств штаммов V. parahaemolyticus, выделенных из балластных вод судов, прибывающих в Международные порты Ростовской области 100
5.3 Оценка антибиотикорезистентности штаммов V. parahaemolyticus и V. alginolyticus
5.3.1 Изучение чувствительности/устойчивости клинических штаммов V. parahaemolyticus к представителям различных групп антибактериальных препаратов in vitro 106
5.3.2 Изучение чувствительности/устойчивости клинических штаммов V. alginolyticus, к представителям различных групп антибактериальных препаратов in vitro 110
5.3.3 Отношение к антибактериальным препаратам штаммов V. parahaemolyticus и V. alginolyticus, выделенных из объектов окружающей среды (ООС) 113
5.5 Анализ свойств и тестирование коллекционных штаммов V. alginolyticus на присутствие генов, сопряженных с патогенностью 117
Заключение 120
Выводы 125
Список сокращений и условных обозначений 127
Список литературы 1
