Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1 Биология, экология и патогенность L. monocytogenes 11
1.1.1 Общие сведения о листериях 11
1.1.2. Распространение листериоза среди людей 12
1.1.3. Листериоз домашних животных 16
1.1.4. Распространение листерий в природных очагах 18
1.2 Основные механизмы внутриклеточного размножения 20
1.3 Структурно-функциональная характеристика факторов инвазии семейства интерналинов 24
Глава 2. Материалы и методы 35
2.1.Материалы. 35
2.2 Микробиологические методы 44
2.2.1 Условия культивирования. 44
2.2.2 Подготовка компетентных клеток для электропорации. 44
2.2.3. Подготовка культуры для инфицирования эукариотических клеток 45
2.2.4. Подотовка культуры для инфицирования мышей 45
2.2.5. Приготовление лизатов L. monocytogenes для ПЦР 45
2.2.6. Электропорация 46
2.3. Молекулярно-генетические методы. 46
2.3.1. Праймеры, использованные в работе 46
2.3.2. Полимеразная цепная реакция.
2.3.3 Выделение фрагментов ДНК из геля и подготовка к секвенированию 49
2.3.4 Определение нуклеотидной последовательности
2.3.5. Рестрикция 49
2.3.6. Лигирование 50
2.4. Биологические методы 50
2.4.1. Клеточные линии и условия их культивирования 50
2.4.2. Определение эффективности инвазии. 51
2.4.3. Экспериментальная модель листериоза с внутривенным путем инфицирования. 52
2.4.4 Экспериментальная модель листериоза с интрагастральным путем инфицирования . 52
2.4.5 Экспериментальная модель листериоза с внутрибрюшинным путем инфицирования. 53
2.5. Insilico методы 53
2.5.1. Анализ нуклеотидных последовательностей 53
2.5.2. Построение дендрограм 53
2.5.3. Анализ нуклеотидного разнообразия 53
2.5.4. Статистические методы. 54
Глава 3. Результаты собственных исследований 55
3.1 Характеристика штаммов, использованных в работе 55
3.2 Аллельный анализ inlB 58
3.3 Анализ аллельного разнообразия фрагмента гена inlA, кодирующего интерналиновый домен 67
3.4 Замены аминокислот в природных вариантах факторов инвазии 76
3.5 Структурные различия между природными вариантами интерналинового домена InlB 81
3.6 Конструирование изогенных штаммов L. monocytogenes для анализа функциональных различий между природными вариантами InlB 85
3.7 Различия в эффективности инвазии изогенных штаммов L. monocytogenes в клетки человека и мышей 88
3.8 Различия в эффективности и динамике инфекции мышей линии Balb/c 90
Глава 4. Обсуждение 99
Выводы 113
Список литературы
