Введение
Глава1. Молекулярно-эпидемиологическая характеристика и диагностика вирусного гепатита В (обзор литературы) 15
1.1. Вирус гепатита B 15
1.1.1. Молекулярно-биологическая структура вируса гепатита B 15
1.1.2. Организация генома, гены и белки вируса гепатита B 16
1.1.3. Жизненный цикл и репликация вируса гепатита В 19
1.2. Вариабельность вируса гепатита B 22
1.2.1. Гетерогенность вируса гепатита B 22
1.2.2. Распространенность генотипов вируса гепатита B в мире 24
1.2.3. Влияние генотипов вируса гепатита B на течение заболевания 26
1.3. Естественное течение ГВ 27
1.4. Скрытый ВГВ 28
1.4.1. Характеристика скрытого ВГВ 28
1.4.2. Распространенность скрытого ВГВ 31
1.5. Диагностика ВГВ 33
1.5.1. Серологические методы диагностики ВГВ 33
1.5.2. Молекулярно-биологические методы диагностики ВГВ 35
1.5.3. Особенности диагностики скрытого ВГВ 36
Глава 2. Материалы и методы 39
2.1. Характеристика биологического материала 39
2.2. Отбор и транспортировка образцов 41
2.3. Объем клинико-лабораторных исследований 42
2.4. Иммуноферментный анализ. Качественные методы исследования. Алгоритмы подтверждения результатов 43
2.5. Молекулярно-биологические методы 45
2.5.1. Выделение нуклеиновых кислот 45
2.5.2. Полимеразная цепная реакция 45
2.5.3. Выявленияе ДНК ВГВ в плазме при низкой вирусной нагрузке на основе двухэтапной ПЦР 46
2.5.4. Очищение продуктов амплификации и секвенирующей реакции 47
2.5.5. Секвенирование ДНК ВГВ 48
2.5.6. Филогенетический анализ и статистическая обработка полученных данных 49
Глава 3. Разработка метода выявления ДНК ВГВ в плазме крови на основе технологии пцр при низкой вирусной нагрузке 51
3.1. Разработанный метод 51
3.1.1. Оценка аналитической чувствительности разработанного метода 51
3.1.2. Оценка специфичности разработанного метода 57
3.2. Апробация метода на выборке с нехарактерным для РФ профилем геновариантов ВГВ 59
Глава 4. Молекулярно-генетический анализ ВГВ при HBsAg-позитивной форме течения заболевания 64
4.1. Молекулярно-генетический анализ ВГВ при остром вирусном гепатите В в Северо-Западном Федеральном Округе РФ 64
4.2. Молекулярно-генетический анализ ВГВ при HBsAg-позитивной хронической форме течения заболевания в РФ 68
4.3. Молекулярно-генетический анализ ВГВ при HBsAg-позитивной хронической форме течения заболевания в некоторых странах Средней Азии 75
Глава 5. Молекулярно-генетический анализ ВГВ при скрытой форме течения заболевания 82
5.1. Молекулярно-генетический анализ ВГВ у ВИЧ-инфицированных лиц в Российской Федерации 82
5.2. Молекулярно-генетический анализ ВГВ у HBsAg-негативных пациентов с гепатитом различной этиологии в некоторых странах Средней Азии 90
5.3. Молекулярно-генетический анализ ВГВ у HBsAg-негативных доноров крови в Республике Казахстан 93
5.4. Молекулярно-генетический анализ ВГВ у HBsAg-негативных доноров крови в г.Челябинск, РФ 96
5.5. Разнообразие ВГВ в обследованной группе 99
Заключение 101
Выводы 120
Практические рекомендации 121
Перспективы дальнейшей разработки темы исследования 123
Список используемых сокращений 124
Список литературы 125
