Введение
1.Обзор литературы 8
1.1.Общая характеристика герпесвирусов 8
1.2. Строение и вариабельность генома герпесвирусов человека 11
1.3. Клиническая характеристика герпесвирусных инфекций 15
1.4. Значение герпесвирусов в урогенитальной патологии 17
1.5. Значение герпесвирусов в трансплантологии 20
1.6. Латентность герпесвирусов 24
1.7. Методы диагностики герпетических инфекций 26
2. Материалы и методы 35
2.1. Характеристика клинических образцов 35
2.2. Штаммы вирусов и контрольные ДНК 35
2.3. Выделение ДНК 37
2.4. Подбор праймеров 37
2.5. Полимеразная цепная реакция 38
2.6. Рестрикционный анализ 40
2.7. Секвенирование 40
2.8. Статистическая обработка данных 40
3. Результаты исследований 41
3.1. Конструирование диагностических систем для комплексной детекции герпесвирусов человека 41
3.1.1. Выбор генетической мишени для комплексной детекции герпесвирусов 41
3.1.2. Конструирование ПЦР-системы для комплексной детекции вируса простого герпеса 1 и 2 типа (ВПГ 1 и 2), цитомегаловируса (ЦМВ), вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) и вируса герпеса человека 8 типа (ВГЧ 8) 42
3.1.3. Проверка работоспособности праймеров и оптимизация условий проведения ПЦР 45
3.1.4. Анализ рестрикционного полиморфизма амплифицируемого универсального фрагмента гена ДНК-полимеразы вирусов ВПГ-І, ВПГ-2, ЦМВ, ВЭБ и ВГЧ-8 48
3.1.5. Конструирование ПЦР-системы для комплексной детекции и дифференциации вирусов герпеса человека 6 и 7 типа (ВГЧ-6 и -7) 53
3.2. Изучение видового многообразия герпесвирусов человека, выявляемых в биоматериале медицинского значения 56
3.2.1. Определение аналитической и диагностической чувствительности систем «Пентагерп» и «Герп 67» 56
3.2.2. Сравнение способов обработки клинического материала для ПЦР-анализа 58
3.2.3. Значение комплексного выявления герпесвирусов в клиническом материале урологического и гинекологического профиля 60
3.2.4. Определение частоты встречаемости герпесвирусов у доноров аллотрансплантанта почки. Изучение особенностей течения раннего посттрансплантационного периода у реципиентов, получивших органы от инфицированных доноров 63
4. Обсуждение результатов 66
Выводы 76
