Введение
1. Введение 7
1.1. Актуальность исследования 7
1.2. Цель и задачи исследования 10
1.3. Научная новизна и практическая значимость работы
1.3.1. Научная новизна работы 10
1.3.2. Практическая значимость работы 12
1.4. Положения, выносимые на защиту 13
2. Обзор литературы 16
2.1. Муковисцидозный трансмембранный регулятор проводимости 17
2.1.1. Ген CFTR, его продукти функция 17
2.1.2. CFTR мутации
2.1.2.1. Классификации CFTR мутаций в зависимости от первичного повреждающего эффекта 20
2.1.2.2. Разработка новых методов терапии в зависимости от типа CFTR мутаций
2.1.3. Частота муковисцидоза и распределение CFTR мутаций в различных регионах мира 27
2.1.4. Источники происхождения и распространения некоторых CFTR мутаций в европейских популяциях 35
2.1.5. Преимущество гетерозиготных носителей CFTR мутаций - вероятная причина высокой частоты муковисцидоза в Европе? 39
2.2. Причины клинического разнообразия муковисцидоза 42
2.2.1. Корреляции CFTR генотипа и фенотипа при MB 43
2.2.2. Комплексные аллели 47
2.2.3. Регуляция сплайсинга. Механизмы регуляции уровня CFTR 48
2.2.4. Возможные гены модификаторы течения муковисцидоза
2.2.4.1. Ген эндотелиальной синтазы оксида азота 53
2.2.4.2. Гены фактора некроза опухоли а и лимфотоксина а 55
2.2.4.3. Ген глутатион-8-трансферазы Ml 58
2.2.3.1. Ген маннозо-связывающего лектина 60
2.2.3.2. Ген гемохроматоза 64
2.3. Диагностика и классификация MB 66
2.4. Популяционный скрининг на муковисцидоз 69
3. Материалы и методы исследования 77
3.1. Реактивы, ферменты, биопрепараты 77
3.2. Материалы исследования
3.2.1. Характеристика выборки больных 77
3.2.2. Популяционные выборки 78
3.2.3. Характеристика контрольной группы 79
3.2.4. Характеристика материала исследования 80
3.3. Методы исследования 80
3.3.1. Молекулярно-генетические методы 80
3.3.1.1. Выделение геномной ДНК 80
3.3.1.2. Идентификация мутаций в гене CFTR 81
3.3.1.3. Анализ внутригенных и внегенных полиморфизмов гена CFTR 88
3.3.1.4. Анализ полиморфизмов в генах eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 и HFE1
3.3.2. Общеклинические методы 92
3.3.3. Статистическая обработка результатов исследований 93
4. Результаты и обсуждение 95
4.1. Расчет частоты муковисцидоза, изучение спектра и частот CFTR
мутаций у больных муковисцидозом и в популяциях Российской Федерации 95
4.1.1. Анализ относительных частот CFTR мутаций у больных MB 95
4.1.2. Поиск мутаций в 5 дистальной и промоторной области гена CFTR 104
4.1.3. Распределение CFTR мутаций у российских больных MB в разных регионов и этнических групп 107
4.1.4. Протокол проведения прямой ДНК-диагностики у российских больных MB Ill
4.1.4. Анализ частоты некоторых мутаций в гене CFTR в ряде популяций России 118
4.1.5. Расчет частоты муковисцидоза в популяциях русских европейской части России 124
4.2. Молекулярно-генетическая диагностика в российских семьях с муковисцидозом 128
4.2.1. Ассоциация гаплотипов внегенных ДНК-маркеров с мутантными и нормальными хромосомами 128
4.2.2. Анализ частот аллелей и гаплотипов внутригенных полиморфизмов в выборках нормальных и мутантных хромосом
4.2.2.1. Анализ частот аллелей внутригенных полиморфизмов на нормальных и мутантных хромосомах 131
4.2.2.2. Анализ частот гаплотипов внутригенных полиморфизмов на нормальных и мутантных хромосомах 137
4.2.3. Эффективность комплексной ДНК-диагностики MB 146
4.3. Взаимосвязь CFTR генотипа и фенотипа у российских больных MB 153
4.3.1. Особенности клинической картины у пациентов с «тяжелыми» и «мягкими» генотипами 153
4.3.2. Вариабельность клинической картины внутри групп больных MB с «тяжелыми» и «мягкими» генотипами 167
4.4. Анализ ряда генов как возможных модификаторов клинических проявлений муковисцидоза 170
4.4.1. Анализ частот аллелей и генотипов полиморфизмов генов eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 и HFE1 у больных MB и здоровых индивидов 172
4.4.2. Анализ ассоциаций полиморфизмов генов eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 и HFE1 с поражением дыхательной системы у больных MB 183
4.4.3. Анализ ассоциаций полиморфизмов генов eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 и HFE1 с поражением пищеварительной системы у больных MB 191
4.4.4. Оценка функции выживаемости у больных MB с разными генотипами по генам eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 uHFEl 196
4.5. Медико-генетическое консультирование у российских семей с MB 199
4.5.1. Расчет риска у новорожденных, выявленных при неонатальном скрининге на муковисцидоз 201
4.5.2. Расчет риска муковисцидоза у плода с эхогенным кишечником
5. Заключение 223
6. Выводы 228
7. Список литературы
