Введение
ГЛАВА 1. Роль молекулярно-генетических технологий в диагностике заболеваний молочной железы (литературный обзор) 17
1.1 Современная концепция канцерогенеза. Изменения молекулярно-генетических характеристик при РМЖ, стадийность процесса 17
1.2 Сравнение спорадического и наследственного рака молочной железы 19
1.3 Молекулярно-генетические изменения при заболеваниях молочной железы
1.3.1 Тканеспецифические гены молочной железы 23
1.3.2 Функциональная роль основных генов канцерогенеза РМЖ 29
1.4 Возникновение понятия о молекулярных фенотипах опухоли. Место молекулярного фенотипа в современной классификации РМЖ 42
1.5 Примеры клинического применения прогностических индексов на основе анализа экспрессии генов 54
1.6 Перспективы развития молекулярно-генетических технологий в диагностике и прогнозе рака молочной железы 62
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 66
2.1 Объект и дизайн исследования. Критерии включения и исключения, формирование групп 66
2.1.1 Дизайн исследования и описание групп 66
2.1.2 Критерии включения и исключения, формирование групп 69
2.1.3 Клинико-морфологическая характеристика пациентов 70
2.2 Методы исследования 81
2.2.1 Анализ уровня экспресии генов методом РВ-ПЦР в операционном материале ткани молочной железы 81
2.2.2 Методы выделения и постановки реакции ОТ-ПЦР для парафинизированных тканей 86
2.2.3 Определение критериев отбора нормальной (морфологически неизмененной) ткани молочной железы, как референтного стандарта 90
2.2.4 Разработка методики обратной транскрипции и количественной полимеразной цепной реакции с использованием специально разработанных праймеров, адаптированных к характеристикам мРНК, выделяемой из парафинизированной ткани 92
2.2.5 Анализ мРНК в образцах крови 94
2.3 Статистическая обработка 96
ГЛАВА 3. Исследование молекулярно-генетических показателей при заболеваниях молочной железы (собственные результаты) 101
3.1 Анализ уровня экспрессии генов в зависимости от типа ткани 102
3.1.1 Сравнение морфологически неизмененной ткани (НТ) и ткани рака молочной железы (РМЖ) 102
3.1.2 Определение оптимальной панели биомаркеров для диагностики и прогноза заболеваний молочной железы. Алгоритм применения полученной панели генов при обследовании пациенток с патологией молочной железы. 113
3.2 Анализ уровня экспрессии генов в зависимости от клинико-морфологических характеристик опухоли рака молочной железы 119
3.2.1 Анализ экспрессии генов в ткани РМЖ в зависимости от морфологической характеристики опухоли 120
3.2.2 Анализ экспрессии генов в зависимости от размеров опухоли (показатель T по классификации TNM) 121
3.2.3 Анализ экспрессии генов в зависимости от наличия метастатических
лимфоузлов (показатель N по классификации TNM) 121
3.2.4 Анализ экспрессии генов в ткани РМЖ в зависимости от статуса рецепторов 123
3.2.5 Анализ экспрессии генов в ткани РМЖ в зависимости от степени злокачественности 125
3.3 Проверка надежности полученных результатов на расширенной группе 127
3.4 Взаимосвязь экспрессии мРНК маммаглобина с клинико-морфологическими особенностями патологии молочных желез 133
3.4.1 Исследование экспрессии мРНК маммаглобина в образцах тканей молочной железы 133
3.4.2 Исследование экспрессии мРНК маммаглобина в крови 145
3.5 Сравнительная оценка моделей определения фенотипа опухоли с использованием расширенной панели экспрессии генов и панели классических маркеров, определяемых методом ИГХ при РМЖ 148
3.5.1 Модель фенотипирования РМЖ на основе анализа профиля экспрессии генов 150
3.5.3 Отличия уровней экспрессии генов, не включенных в «суррогатный» ИГХ
метод в выявленных фенотипах и анализ безрецидивной выживаемости 167
3.5.4 Оценка воспроизводимости фенотипирования с использованием редуцированной модели и сравнительный анализ выживаемости 170
3.5.5 Проспективный анализ эффективности определения молекулярного фенотипа РМЖ 174
3.5.6 Прогноз рецидивирования на основании математической модели, включающей профиль экспрессии генов в ткани опухоли 177
3.5.7 Разработка математической модели определения риска локо-регионального рецидивирования (ЛРР) у пациенток с РМЖ при радикальной резекции 18888
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов исследования 1967
4.1 Место молекулярно-генетического метода в комплексной диагностике РМЖ
1967
4.2 Перспективы использования молекулярно-генетических технологий в диагностики и прогнозе заболеваний молочной железы 20909
4.3 Гетерогенность ткани РМЖ и методы ее оценки 2122
Выводы 2233
Практические рекомендации 2255
Список сокращений и условных обозначений 2277
Список литературы 229
