Введение
1. Обзор литературы 7
1.1. Объект исследований 7
1.1.1. Краткая характеристика семейства Coccinellidae 7
1.1.2. Полиморфизм вида Adalia bipunctata 9
1.2. Особенности эволюции мтДНК насекомых 14
1.2.1. Свойства мтДНК 14
1.2.2. Различия в скорости эволюции синонимичных и несинонимичных сайтов 15
1.2.3. Филогения видов на основе изучения мтДНК 25
1.3. Изменчивость рДНК в эволюции эукариот 35
1.4. Методы филогенетического анализа 38
2. Материалы и методы 42
2.1.1. Выделение ДНК 42
2.1.2. Электрофорез 43
2.1.3. Амплификация 43
2.1.4. Получение очищенных ПЦР продуктов 44
2.1.5. Лигирование 44
2.2. Трансформация клеток Е. coli 45
2.2.1. Приготовление компетентных клеток 45
2.2.2.Трансформация компетентных клеток 45
2.2.3. Выделение плазмиднои ДНК и очистка для идентификации истинных рекомбинантов 46
2.2.4. Рестрикция рекомбинантных плазмид для установления длины вставки 47
2.3. Секвенирование 47
2.3.1. Подготовка секвенирования и фореза для секвенирования 47
2.3.2. Приготовление реакционной смеси (на одну реакцию) 49
2.4. Компьютерный анализ 50
3. Результаты и обсуждение
3.1. Анализ первичной структуры З-области гена субъединицы I цитохромоксидазы десяти видов кокцинеллид 51
3.1.1. Клонирование и анализ первичной последовательности фрагмента гена цитохромоксидазы I десяти видов божьих коровок 51
3.1.2. Реконструкция филогении десяти видов божьих коровок 64
3.2. Исследование изменчивости нуклеотидных последовательностей участка митохондриального гена цитохромоксидазы I внутри вида Adalia bipunctata 69
3.3. Сравнительный анализ полиморфизма длин внутренних транскрибируемых спейсеров рДНК кокцинеллид 74
4. Выводы 79
5. Список литературы 80
6. Приложение 91
