Введение
Глава 1. Обзор литертатуры 12
1.1 Строение сосудов 12
1.2 Регуляция кальциевого обмена в гладкомышечных клетках сосудов 15
1.2.1 Регуляция кальциевого обмена с помощью кальциевых каналов и насосов цитоплазматической мембраны 15
1.2.2 Регуляция кальциевого обмена с помощью кальциевых каналов и насосов сарко/эндоплазматического ретикулума 18
1.3 Механизм сокращения сосудов 19
1.4 Артериальная гипертензия 22
1.4.1 Модель ДОКА-солевой гипертензии крыс 22
1.4.2 Патогенез ДОКА-солевой гипертензии 23
1.4.3 NADPH-оксидазы и АФК в патогенезе гипертензии 26
1.4.4 Образование и обмен АФК при гипертензии 28
1.4.5 NADPH-оксидазы 30
1.4.6 Регуляция NADPH-оксидазной активности 31
1.4.7 NADPH-оксидазы, оксидативный стресс и гипертензия 31
1.5 Роль серотонина в регуляции сосудистой сократимости 35
1.5.1 Общие сведения 35
1.5.2 Биосинтез серотонина 36
1.5.3 Влияние серотонина на тонус сосудов 38
Глава 2. Материалы и методы 44
2.1 Реактивы 44
2.2 Животные 44
2.3 Вестерн-Блоттинг 44
2.4 Иммунофлуоресцентное окрашивание 5-HT2B рецепторов в ГМК 45
2.5 ПЦР в реальном времени 46
2.6 Измерение сокращения аорты и брыжеечной артерии в изометрическом режиме 47
2.7 Культура гладкомышечных клеток выделенных из аорты крысы 48
2.8 Культура эндотелиальных клеток выделенных из пупочной вены человека 49
2.9 Измерение изменения концентрации цитоплазматического кальция в гладкомышечных клетках аорты крысы с помощью флуоресцентного зонда Fura-2AM 50
2.10 Измерение изменения концентрации цитоплазматического кальция в эндотелиальных клетках, выделенных из пупочной вены человека, с помощью флуоресцентного зонда Calcium Green-1AM 51
2.11 Измерение изменения концентрации активных форм кислорода в гладкомышечных клетках аорты крысы с помощью флуоресцентного зонда H2DCF-DA 51
2.12 Статистика 52
Глава 3. Результаты 53
3.1 Оценка экспрессии 5-HT2B рецепторов в аорте, брыжеечной артерии и гладкомышечных клетках, выделенных из аорты крысы 53
3.2 Влияние агониста рецепторов 5-НТ2В BW723C86 на кальциевый обмен в гладкомышечных клетках, выделенных из аорты крысы 55
3.3 Влияние агониста рецепторов 5-НТ2В BW723C86 на образование активных форм кислорода в гладкомышечных клетках, выделенных из аорты крысы 63
3.4 Роль NADPH-оксидаз и активных форм кислорода в регуляции кальциевого обмена 5-НТ2В рецепторами в эндотелиальных клетках пупочной вены человека 68
3.5 Эксперименты на изолированных сосудах крысы 73
Глава 4. Обсуждение 77
4.1 Экспрессия 5-НТ2В рецепторов в ГМК 77
4.2 Влияние АФК на регуляцию обмена кальция в ГМК при активации 5-HT2B рецепторов; роль тирозинового фосфорилирования 78
4.3 Индукция образования АФК вызывает усиление кальциевого сигнала 5-НТ2В рецепторов в ЭК пупочной вены человека 83
4.4 Демаскировка вазоконстрикторного действия агониста 5-НТ2В рецепторов BW723C86 под влиянием АФК 84
Заключение 87
Выводы 88
Список сокращений 89
Список литературы 90
