Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
Моноклональные антитела в диагностике и терапии. онкологических заболеваний 11
1.1. Общие аспекты применения моноклональных антител в онкологии 11
1.1.1. Иммунохимический анализ в онкологии 11
1.1.2. Диагностические и лекарственные препараты на основе МАТ в онкологии 15
1.2. МАТ в диагностике и терапии опухолей головного мозга 18
1.2.1. Молекулярные механизмы деструкции ГЭБ в процессе опухолевой инвазии глиобластом 19
1.2.2. Потенциальные мишени для иммунодиагностики и иммунотерапии глиом 23
1.2.3. Роль GFAP в реактивном глиозе в ответ на опухолевую инвазию 27
1.2.5. Перспективы диагностики и терапии низкодифференцированных глиом с
помощью меченых радионуклидом моноклональных антител 32
1.3. Резюме 38
ГЛАВА 2. Материалы и методы 41
2.1. Характеристика исследуемого материала 41
2.2. Общая характеристика экспериментальной работы 42
2.3. Моделирование интракраниальной глиобластомы 43
2.3.1. Культивирование глиомных клеток Сб 43
2.3.2. Стереотаксическое введение глиомных клеток Сб в каудопутамен мозга крысы 44
2.3.3.Оценка развития имплантированной глиомы Сб 44
2.4. Гистологические методы 44
2.4.1. Окрашивание срезов мозга крезиловым фиолетовым и толлуидиновым синим для оценки инвазии имплантированных глиомных клеток Сб 44
2.4.2. Окрашивание срезов мозга ванадиевым- кислым фуксином с последующим докрашиванием толуидином т 46
2.5. Иммунохимические методы 46
2.5.1. Аффинная хроматография МАТ на протеин-А-агарозе 46
2.5.2. Иммуногистохимический анализ антигенов, ассоциированных со структурами ГЭБ 47
2.5.3. Иммунофлюоресцентное исследование методом световой и лазерной
конфокальной микроскопии антигенов структур, формирующих ГЭБ, на срезах
головного мозга крыс с глиомой Сб 49
2.5.4. Иммуноферментный анализ GFAP в сыворотке крови крыс 50
2.6. Радиохимические методы 52
2.6.1. Коньюгирование МАТ с радиоактивным Iі25 52
2.6.2. Тонкослойная хроматография препарата 1251-МАТ 52
ч 2.6.3. Диск-электрофорез препарата 1251-МАТ 53
f 2.6.4. Анализ радиоактивности 1251-МАТ в органах крысы с глиомой Сб 53
2.6.5 Контактная радиоавтография срезов головного мозга крыс с глиомой Сб 54
2.6.5 Кислотная преципитация органов крыс с глиомой Сб после внутривенного
введения 1251-меченных МАТ 54
2.7. Схема эксперимента по оценке селективного накопления в органах 1251-MAT 55
2.7.Статистическая обработка полученных результатов 56
Результаты исследования 57
ГЛАВА 3. Гистологический и иммуногистохимический анализ экспериментальной глиомы сб крысы 57
3.1. Результаты оценки инвазии глиомы Сб по общему состоянию крыс и по неврологическому статусу 57
3.2. Гистологический анализ инвазии глиомных клеток Сб 57
3.3. Иммуногистохимический анализ AMVB1, ЕВА и GFAP на срезах головного мозга крыс с глиомой Сб 61
3.4. Оценка проницаемости ГЭБ с помощью высокомолекулярных агентов при развитии глиомы Сб 73
ГЛАВА 4. Ифа GFAP в сыворотке крови крыс с глиомой сб с последующим изученим взаимосвязи морфометрических показателей глиомы и концентрации gfap в сыворотке крови крыс в динамике опухолевого процесса 75
4.1. Характеристика иммуноферментной тест-системы и нормальные показатели GFAP в сыворотке крови крыс 75
4.2. Динамика концентрации GFAP при экспериментальной глиоме Сб 76
4.3. Морфометрический анализ глиомы Сб на серийных гистологических срезах мозга в разные сроки ее инвазии 78
4.4. Морфометрический анализ астроглиального вала на серийных срезах мозга
методом флюоресценции 80
4.5. Динамика развития глиомы по данным МРТ-исследования 82
4.6. Корреляционный анализ показателей морфометрии и концентрации GFAP в
сыворотке крови 86
ГЛАВА 5. Направленный транспорт меченых антител к gfap и amvb1 в область глиомы сб при введении в системный кровоток крысы 90
5.1. Характеристика 1251-МАТ 90
5.2. Распределение меченых антител к GFAP и AMVB1 в органах после внутривенного введения крысам с экспериментальной глиомой Сб 92
5.2.1. Кинетика меченных 125ІМАТ в крови 92
5.2.2. Распределение меченных 1251 МАТ во внутренних органах крыс с глиомой Сб 93
5.2.3. Накопление меченных 1251 МАТ к GFAP и AMVB1 и IgGm в полушариях мозга крыс с глиомой Сб 94
5.2.4. Конкурентное ингибирование накопления меченных I антител к GFAP в
пораженном полушарии мозга крыс 96
5.3. Контактная авторадиография препаратов головного мозга крыс с глиомой Сб после введения меченных I антител 98
5.4. Биодеградация йодированных МАТ в крови и органах после введения в системный кровоток крысам с глиомой Сб 99
ГЛАВА 6. Обсуждение полученных результатов 103
Выводы 109
Практические рекомендации по
Литература 111
