Введение
I Обзор литературы 10
1.1. Общая характеристика структуры волосяного фолликула 10
1.2. Формирование эпидермиса 12
1.3. Морфогенез волосяного фолликула 14
1.4. Стадии формирования волосяного фолликула 15
1.5. Ориентация волосяных фолликулов вдоль передне-задней оси 15
1.6. Типы волосяных фолликулов в шерстном покрове мыши 17
1.7. Регуляция морфогенеза волосяного фолликула 19
1.7.1. Индукция закладки волосяных фолликулов 19
1.7.2. Образование и стабилизация плакоды 22
1.7.3. Образование дермального компонента волосяных фолликулов 25
1.7.4. Пролиферация кератиноцитов и рост волосяных фолликулов 26
1.7.5. Дифференциация кератиноцитов волосяных фолликулов 28
1.8. Стволовые клетки волосяного фолликула 33
1.9. Эпидермальная базальная мембрана 35
1.10. Апико-базальная асимметрия базальных кератиноцитов 40
1.11. Интегрины в формировании и гомеостазе эпидермиса и волосяных фолликулов 42
1.12. Наследственные патологии волос и их модели у лабораторных животных 48
1.13. Мутантные мыши we/we wal/wal 56
II Материалы и методы 57
11.1. Материалы 57
11.1.1. Лабораторные животные 57
11.1.2. Лабораторное оборудование 57
11.1.3. Химические реактивы 57
11.2. Методы 59
11.2.1. Определение типов волос 59
11.2.2. Датирование беременности у мыши 59 II.
2.3.Забор материала 59
11.2.4. Криоблоки 59
11.2.5. Иммуногистохимическое исследование 60
11.2.6. Выявление активности щелочной фосфатазы 61
11.2.7. Гистологическое исследование 61
11.2.8. Тотальный препарат эмбрионального эпидермиса 61
11.2.9. Фиксация тотального эпидермиса для световой микроскопии 62
11.2.10. Тотальный препарат постнатального эпидермиса хвоста 62
11.2.11. Выделение культуры первичных эмбриональных кератиноцитов мыши 62
11.2.12. Культивирование первичных эмбриональных базальных кератиноцитов
мыши 63
11.2.13. Индукция дифференциации кератиноцитов в культуре 63
11.2.14. Проточная цитофлуориметрия 63
11.2.15. Выявление метки BrdU в культуре кератиноцитов 64
11.2.16. Инъекция BrdU новорожденным мышам и выявление метки в тотальном препарате эпидермиса 64
11.2.17. Модель заживления кожной раны 64
11.2.18. Индукция стадии роста волосяных фолликулов с помощью депиляции 65
11.2.19. Статистическая обработка результатов 65
III Результаты и обсуждение 67
111.1. Фенотип шерстного покрова постнатальных мышей we/we wal/wal 67
111.1.1. Общая характеристика шерстного покрова 67
111.1.2. Структура стержней волос 69
111.2. Стволовые клетки волосяных фолликулов мышей we/we wal/wal 71
111.2.1. Выявление стволовых клеток волосяных фолликулов, длительно сохраняющих метку ДНК 71
111.2.2. Экспрессия кератина 15, маркера стволовых клеток волосяных фолликулов 72
111.3. Регенерация кожи и волосяных фолликулов мышей we/we wal/wal 74
111.3.1. Индукция роста волосяных фолликулов 74
111.3.2. Заживление кожной раны у взрослых особей we/we wal/wal 77
111.4. Паттерн распределения и параметры волосяных фолликулов в эмбриональном эпидермисе мышей we/we wal/wal на Е18.5 80
111.4.1 Количество зачатков волосяных фолликулов и плотность их распределения 80
111.4.2. Параметры волосяных фолликулов: высота и ширина в основании 82
111.5. Формирование эпителиального и мезенхимного компонента волосяных фолликулов эмбрионов Е18.5 мышей we/we wal/wal 84
111.5.1. Утолщения базального слоя у эмбрионов we/we wal/wal 84
111.5.2. Утолщения базального слоя – аномальные плакоды мутантных волосяных фолликулов 87
111.5.3. Реализация сигнального пути WNT в деформированных мутантных зачатках волосяных фолликулов 89
111.5.4. Характер образования дермального компонента мутантных волосяных фолликулов 91
111.6. Дифференциация эпидермиса эмбрионов Е18.5 мышей we/we wal/wal 94
111.6.1. Пролиферация супрабазальных кератиноцитов we/we wal/wal 94
111.6.2. Аномалии базальной мембраны эмбриональной кожи мутантов 96
111.6.3. Стратификация и ороговение эмбрионального эпидермиса we/we wal/wal 98
111.7. Пролиферация и дифференциация эмбриональных кератиноцитов мышей we/we wal/wal в условиях in vitro 102
111.7.1. Пролиферация в культуре первичных кератиноцитов 102
111.7.2. Доля клеток в фазе S клеточного цикла 103
111.7.3. Распределение кератиноцитов по фазам клеточного цикла 104
111.7.4. Индукция дифференциации культуры первичных кератиноцитов 105
111.8. Образование клеток-предшественников стержня волоса у эмбрионов Е18.5 мышей
we/we wal/wal 108
Заключение 110
Выводы 112
Список литературы
