Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1 Нейродегенеративные заболевания 12
1.2 Моделирование бокового амиотрофического склероза 16
1.3 Генная терапия нейродегенеративных заболеваний 18
1.4 Клеточная терапия нейродегенеративных заболеваний 22
1.5. Стратегии генно-клеточной терапии нейродегенеративных заболеваний 31
1.5.1. Терапевтические гены 31
1.5.2 Генно-клеточная терапия 35
1.5.3 Генетически модифицированные мононуклеарные клетки крови пуповины человека для
терапии бокового амиотрофического склероза 37
1.6 Перспективы внедрения генно-клеточных препаратов для терапии нейродегенеративных
заболеваний 38
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 40
2.1 Получение генно-клеточного препарата 40
2.1.1 Забор крови пуповины человека 40
2.1.2 Выделение мононуклеарных клеток крови пуповины человека 42
2.1.3 Трансдукция мононуклеарных клеток крови пуповины человека 42
2.1.4 Анализ эффективности трансдукции мононуклеарных клеток крови пуповины человека in vitro 2.2 Ксенотрансплантация мононуклеарной фракции крови пуповины человека трансгенным SOD1 G93A мышам 46
2.3 Оценка эффективности генно-клеточной терапии
2.3.1 Клиническая оценка развития заболевания и продолжительности жизни животных 47
2.3.2 Тест силы хватки 47
2.3.3 Открытое поле 48
2.4 Гистологические методы исследования 49
2.4.1 Иммунофлуоресцентное окрашивание 50
2.4.2 Морфометрический анализ 52
ГЛАВА 3. Результаты исследования и их обсуждение 53
3.1 Экспрессия рекомбинантных генов генетически модифицированными мононуклеарными клетками крови пуповины человека 53
3.1.1 Биосинтез рекомбинантного белка EGFP in vitro 53
3.1.2 Экспрессия рекомбинантных терапевтических генов в мононуклеарных клетках крови пуповины in vitro 54
3.2 Морфологическое исследование спинного мозга подопытных трансгенных мышей 56
3.2.1 Фенотипирование генетически модифицированных мононуклеарных клеток пуповины человека в спинном мозге трансгенных SOD1 G93A мышей 56
3.2.2 Иммуноэкспрессия рекомбинантных генов в мононуклеарных клетках крови пуповины после трансплантации в спинной мозг SOD1 G93A мышей 61
3.2.3 Адресная миграция и выживание генетически модифицированных мононуклеарных клеток крови пуповины человека после трансплантации трансгенным SOD1 G93A мышам 64
3.3 Поведенческие тесты и анализ продолжительности жизни подопытных животных 67
3.3.1 Иммунотолерантность 67
3.3.2. Поведенческие тесты 67
3.3.3 Продолжительность жизни экспериментальных трансгенных мышей 73
Заключение 75
Выводы 79
Список сокращений 81
Список литературы 84
