Введение
ГЛАВА 1. АМФИФИЛЬНЫЕ ПОЛИМЕРЫ: СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА 10
1.1. Строение амфифильных полимеров 10
1.2. Поведение амфифильных полимеров в растворах 12
1.3. Термодинамические аспекты ассоциации
амфифильных полимеров 15
1.4. Комплексообразование амфифильных полимеров с ПАВ в водных растворах 16
1.5. Взаимодействие амфифильных полимеров с белками 1 8
ГЛАВА 2. НАНОЧАСТИЦЫ НА ОСНОВЕ АМФИФИЛЬНЫХ ПОЛИМЕРОВ 20
2.1. Основные типы полимерных наночастиц 20
2.2. Методы получения полимерных наночастиц из амфифильных полимеров 23
2.3. Получение наночастиц, содержащих БАВ и их свойства 26
ГЛАВА 3. ПОЛИМЕРНЫЕ НАНОСИСТЕМЫ ДЛЯ БИОМЕДИЦИНСКИХ ЦЕЛЕЙ 32
3.1. Требования, предъявляемые к полимеру-носителю БАВ 32
3.1.1. Физико-химические свойства полимера 32
3.1.2. Биосовместимость 34
3.1.3. Биодеградируемость 3 5
3.2. Требования, предъявляемые к полимерным
системам доставки БАВ 36
3.2.1. Состав полимерных систем доставки 36
3.2.2. Размер полимерных систем доставки 37
3.2.3. Скорость высвобождения БАВ 38
3.3. Примеры амфифильных полимеров и наночастиц с включенными БАВ 39
3.4. Поведение полимерных наносистем в организме при основных способах введения 43
3.5. Потенциальные области применения полимерных наночастиц в качестве систем доставки БАВ 46
3.5.1. Противораковая химиотерапия 46
3.5.2. Доставка белковых молекул 4 7
3.5.3. Лечение грибковых и бактериальных инфекций 49
3.5.4. Биомедицинская диагностика 49
ГЛАВА 4. ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ, ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 53
4.1. Амфифильные полимеры, используемые в работе 53
4.1.1. Амфифильные производные поли-И-винилпирролидона 53
4.1.2. Амфифильные производные декстрана 55
4.2. Биологически активные вещества, используемые в работе 58
4.2.1. Тамоксифен 58
4.2.2. Соевый ингибитор протеиназ типа Баумана-Бирк 59
ГЛАВА 5. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 62
5.1. Материалы и оборудование 62
5.1.1. Материалы 62
5.1.2. Оборудование 63
5.2. Определение содержания декстрана в образцах 63
5.2.1. Антроновый метод 64
5.2.2. Метод Дюбуа 64
5.3. Количественное определение ПВП 65
5.4. Определение критической концентрации агрегации 65
5.5. Получение поли-є-капролактоновьіх микрочастиц методом нанопреципитации 66
5.6. Получение декстран-поли-е-капролактоновых микрочастиц эмульсионным методом 66
5.7. Получение наночастиц методом прямого растворения 66
5.7. 1. Получение ПВП-стеар наночастиц 66
5.7.2. Получение Dex-PCL наночастиц 67
5.8. Получение наночастиц диализным методом 67
5.9. Получение наночастиц эмульсионным методом 67
5.10. Изучение устойчивости дисперсии наночастиц 67
5.11. Изучение влияния ионной силы на агрегирование наночастиц 68
5.12. Деградация Dex-PCL наночастиц 68
5.12.1. Деградация декстраназой 68
5.12.2. Деградация липазой 69
5.13. Получение полимерных наночастиц, содержащих соевый ингибитор протеиназ типа Баумана-Бирк 69
5.14. Изучение кинетики высвобождения ВВІ из Dex-PCL наночастиц 70
5.15. Изучение кинетики высвобождения ВВІ при деградации Dex-PCL наночастиц декстраназой 70
5.16.Определение активности ВВІ 70
5.16.1. Определение антитриптической активности 70
5.16.2. Определение антихимотриптической активности 71
5.17. Включение тамоксифена в наночастицы 72
5.18. Количественное определение тамоксифена спектрофотометрическим методом 72
5.19. Изучение кинетики высвобождения тамоксифена из наночастиц 73
5.20. Электрофорез препаратов содержащих ВВІ в ПААГ 73
5.21. Хроматография смеси ВВІ и ПВП-стеар на Сефадексе 74
5.22. Гельпроникающая хроматография препаратов, содержащих ВВІ 74
5.23. Вторая производная спектров УФ поглощения 74
5.24. Определение размеров частиц методом динамического светорассеяния 75
5.25. Измерение электрокинетического потенциала наночастиц 75
5.26. Световая оптическая микроскопия 75
5.27. Конфокальная лазерная сканирующая флуоресцентная микроскопия 76
5.28. Электронная микроскопия 76
5.28.1. Сканирующая электронная микроскопия 76
5.28.2. Трансмиссионная электронная микроскопия 76
5.28.3. Электронная микроскопия замороженных сколов 16
5.29. ЯМР спектроскопия 77
5.30. Изучение устойчивости агрегатов ПВП-стеар в присутствии сыворотки крови 77
5.31. Приготовление стандартных взвесей эритроцитов барана и кролика 77
5.32. Приготовление сенсибилизированных эритроцитов барана 78
5.33. Исследование литического действия препаратов на сенсибилизированные эритроциты барана 79
5.34. Определение влияния альбумина человека на литическое действие препаратов 79
5.35. Изучение влияния наночастиц на активацию системы комплемента 79
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 81
ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ СТРОЕНИЯ И СВОЙСТВ ИССЛЕДУЕМЫХ ПОЛИМЕРОВ 81
ГЛАВА 7. ПВП-СТЕАР И DEX-PCL НАНОЧАСТИЦЫ: ПОЛУЧЕНИЕ И СВОЙСТВА 91
7.1. Получение полимерных наночастиц 91
7.2. Характеристика полимерных наночастиц 94
7.2.1. Размер наночастиц 94
7.2.2. Электрокинетический потенциал наночастиц 100
7.2.3. Изучение структуры полученных наночастиц
методом Н-ЯМР спектроскопии высокого разрешения 102
7.2.4. Изучение структуры Dex-PCL наночастиц
методом электронной микроскопии замороженных сколов 107
7.3. Устойчивость дисперсий наночастиц 107
7.3.1. Агрегативная устойчивость 109
7.3.2. Устойчивость к нагреванию 113
ГЛАВА 8. ФЕРМЕНТАТИВНАЯ ДЕГРАДАЦИЯ DEX-PCL НАНОЧАСТИЦ 116
8.1. Деградация наночастиц декстраназой 116
8.2. Деградация наночастиц липазами 123
ГЛАВА 9. НАНОЧАСТИЦЫ ПВП-СТЕАР И DEX-PCL С ВКЛЮЧЕННЫМИ БАВ 129
9.1. Dex-PCL микрочастицы с включенным флуоресцентным красителем 129
9.2. Наночастицы с включенным ВВІ 130
9.2.1. Включение ВВІ в Dex-PCL наночастщы 130
9.2.2. Включение ВВІ и его гидрофобизованных производных в ПВП-стеар наночастицы 134
9.3. Наночастицы с включенным тамоксифеном 139
9.3.1. Включение тамоксифена в Dex-PCL наночастицы 139
9.3.2. Включение тамоксифена в ПВП-стеар наночастицы 143
ГЛАВА 10. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ НАНОЧАСТИЦ С КОМПОНЕНТАМИ КРОВИ 146
ВЫВОДЫ 152
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 153
