Введение
1. Общая характеристика работы 6
1.1 Актуальность проблемы 6
1.2 Цели и задачи исследования 6
1.3 Научная новизна результатов исследования 7
1.4 Практическая значимость 7
1.5 Апробация работы 7
1.6 Структура и объем работы 7
2. Обзор литературы 9
2.2 Обратная транскрипция ВИЧ 12
2.3 Обратная транскриптаза ВИЧ 14
2.4 Молекулярный механизм полимеразной активности ОТ ВИЧ 17
2.5 Нуклеозидные ингибиторы ОТ ВИЧ (НИОТ) 18
2.6 Ненуклеозидные ингибиторы ОТ ВИЧ 19
2.7 Антивирусная терапия ВИЧ 22
2.8 Механизмы резистентности к ННИОТ ВИЧ 23
2.9 ННИОТ ВИЧ на основе замещенных пиримидинов 2.9.1 ННИОТ на основе диарилзамещенных пиримидинов (DAPY) 25
2.9.2 ННИОТ ВИЧ на основе 1-[(2-гидроксиэтокси)метил]-6-(фенилтио)тимина (HEPT) 47
2.9.3 ННИОТ ВИЧ на основе дигидроалкоксибензилоксопиримидинов (DABO) 64
3.0 ОБСУЖДЕНИЕ И РЕЗУЛЬТАТЫ 72
3.1 Создание панели мутантных форм ОТ ВИЧ 72
3.2 Ингибиторы ОТ ВИЧ на основе бензофеноновых производных пиримидинов. 75
3.3 Ингибиторы ОТ ВИЧ на основе N1-замещенных урацилов, содержащих амидный фрагмент. 88
3.4 Ингибиторы ОТ ВИЧ на основе фенилоксиэтил-производных урацила. 89
3.5 Производные пиримидинов на основе трех дистальных циклов 94
3.6 Ингибиторы ОТ ВИЧ на основе N1,N3-замещенных урацилов 95
3.7 Урациловые ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ-1 на основе 2 ароматических систем и карбоциклического фрагмента. 107
3.8 Ингибиторы ОТ ВИЧ на основе N1,N3-замещенных урацилов и амидного линкера. 108
3.9 Ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ-1 на основе 6-бензилизоцитозинов. 112
4. Материалы и методы 117
4.1 Использованные бактериальные культуры 117
4.2 Получение компетентных клеток E. coli 117
4.3 Бактериальна трансформация методом теплового шока 118
4.4 Манипуляции с плазмидной ДНК 118
4.5 Препаративное выделение плазмид из Е.coli 119
4.6 Получение мутантных вариантов ОТ ВИЧ-1 119
4.7 Экспрессия и выделение дикого типа ОТ ВИЧ-1 в виде гетеродимера 121
4.8 Экспрессия и выделение дикого типа ОТ ВИЧ-1 в виде гомодимера 123
4.9 Экспрессия и выделение гетеродимера мутантных форм ОТ ВИЧ-1 1 4.10 Получение активированной ДНК 124
4.11 Определение активности ОТ ВИЧ-1 124
4.12 Определения зависимости включения [-32P]dATP ОТ ВИЧ-1 от времени 125
4.13 Определение ингибирующей активности соединений 125
4.14 Определение механизма действия ингибитора 1 5. ВЫВОДЫ 126
6. Список литературы
