Введение
ГЛАВА 1 Обзор литературы 13
1.1. Патогенетические основы ишемической болезни сердца 13
1.2. Острый коронарный синдром, общие принципы диагностики 18
1.3. Кардиологические маркеры 21
1.4. Механизм образования ишемически-модифицированный альбумина 26
1.5. Методы определения ишемически-модифицированного альбумина 27
1.6. Кобальт-связывающая способность сыворотки крови как показатель содержания ишемически-модифицированного альбумина 28
1.7. Вклад белков в суммарную кобальт-связывающую способность сыворотки и плазмы крови 30
1.8. Методика определения уровня кобальт-связывающей способности сыворотки крови 32
1.9. Заключение 33
ГЛАВА 2 Материалы и методы 35
2.1. Список использованных материалов 35
2.2. Список использованного оборудования 35
2.3. Объекты исследования 36
Исследование образцов сыворотки крови человека 36
Хранение биологических образцов и пробоподготовка 38
2.4. Список используемых методов 38
Анализ кобальт-связывающей способности 38
Линейность 38
Сходимость/воспроизводимость 39
Предел обнаружения, предел надежного количественного определения 39
Изучение стабильности биологических проб 40
Оценка параметров биологической вариабельности показателя 41
Определение содержания глобулинов в биологической пробе фотохимическим методом с п-диметиламинобензальдегидом 41
Определение содержания сывороточного альбумина и общего белка в сыворотке крови 42
Окислительная модификация альбумина гипохлоритом натрия 42
Окислительная модификация альбумина системой Фентона 42
Сайт-специфическая модификация сывороточного альбумина 43
Анализ постмодификационных структурных изменений белка 43
2.5. Методы статистической обработки данных 43
ГЛАВА 3 Оптимизация протокола определения уровня кобальт-связывающей способности растворов белков и биологических образцов 45
3.1. Определение условий проведения анализа содержания ионов кобальта в
растворе 46
Исследование спектральных характеристики комплекса ДТТ-Со2+.. 46
Кинетика реакции комплексообразования дитиотрейтола с ионами кобальта.46
Исследование спектральных характеристики комплекса дитиотрейтола с ионами кобальта в присутствии бычьего сывороточного альбумина 48
Исследование стабильности реактивов на основе буферных систем MOPS, ТРИС, HEPES, Трицин 51
3.2. Аналитические характеристики метода 54
3.3. Анализ кобальт-связывающей способности сывороточного альбумина.. 60 Оценка кобальт-связывающей способности бычьего сывороточного альбумина с помощью реактивов на основе HEPES, MOPS, ТРИС 60
Оценка коэффициента вариации метода при определении кобальт-связывающей способности образцов сыворотки 63
Зависимость кобальт-связывающей способности альбумина от времени инкубации с ионами кобальта 64
Изучение кинетики реакции комплексообразования дитиотрейтола с ионами кобальта в присутствии бычьего сывороточного альбумина. 65
3.4. Исследование стабильности образцов сыворотки при хранении 68
Стабильность образцов сыворотки в течение дня 68
Стабильность при повторном замораживании-оттаивании 69
Долгосрочная стабильность образцов сыворотки крови 70
3.5. Протокол проведения анализа 71
ГЛАВА 4 Изменения кобальт-связывающей способности сывороточного альбумина под дейвием окислителей in vitro
Глава 5 Определение региональных референтных пределов уровня кобальт-связывающей способности сыворотки крови здоровых добровольцев 78
5.1. Анализ необходимого размера выборки 78
5.2. Анализ корреляционных зависимостей 81
6. ГЛАВА 6 Исследование показателей биологической вариабельности уровня кобальт-связывающей способности сыворотки крови 82
Глава 7 Исследование динамики показателя у пациентов, перенесшихаорто-коронарное шунтирование 89
Глава 8 Исследование образцов сыворотки крови пациентов без острой ишемии миокарда 92
Глава 9 Экономический анализ 95
9.1. Экономическая оценка рыночной цены разработанного метода, сравнение с зарубежными аналогами 95
9.2. Расчет экономической выгоды от внедрения метода определения кобальт-связывающей способности сыворотки крови для диагностики острого коронарного синдрома в рутинную практику диагностических лабораторий97
Заключение 100
Выводы 103
Практические рекомендации 104
Список используемых сокращений 105
Список литературы 107
Приложение А 120
