Введение
1. Обзор литературы 14
1.1. Молекулярные механизмы действия глюкокортикоидов в нормальных и опухолевых клетках 14
1.1.1. Роль глюкокортикоидов в организме 14
1.1.2. Молекулярный механизм действия глюкокортикоидов 16
1.1.3. Действие глюкокортикоидов на клетки иммунной системы в норме и при опухоли 26
1.2. Глюкокортикоиды в лечении лейкозов и лимфом 33
1.2.1. Механизм глюкокортикоид-индуцируемого апоптоза при злокачественных новообразованиях кроветворной системы 34
1.2.2. Глюкокортикоид-опосредованное подавление пролиферативной активности клетки 39
1.3. Современные подходы к совершенствованию терапии глюкокортикоидами 43
1.3.1. Оптимизация систем доставки глюкокортикоидов 43
1.3.2. Современные тенденции в разработке новых препаратов – аналогов глюкокортикоидов 49
2. Материалы и методы 57
2.1. Список реактивов, использованных в работе 57
2.2. Приборы, использованные в работе 59
2.3. Клеточные линии и обработка клеток 59
2.4. Определение антипролиферативного эффекта 60
2.5. Определение уровня апоптоза 60
2.6. Бактериальный тест на мутагенную активность Эймса 60
2.7. Конкурентное связывание 61
2.8. Выделение РНК и обратная транскрипция 62
2.9. Количественная ПЦР 62
2.10. Электрофорез белков в полиакриламидном геле с SDS 63
2.11. Вестерн блоттинг 63
2.12. Трансформация бактериальных клеток 64
2.13. Выделение плазмидной ДНК 65
2.14. Приготовление сред и растворов для работы с бактериями 65
2.15. Использованные вектора 66
2.16. Трансдукция клеток лентивирусными векторами 67
2.17. Определение активности люциферазы 67
2.18. Оценка противоопухолевой активности CpdA-03 in vivo на модели перевиваемой лимфомы Р388 у мышей 67
2.19. Статистическая обработка данных 68
3. Результаты исследования 69
3.1. Противоопухолевый эффект новосинтезированных аналогов глюкокортикоидов in vitro и его зависимость от GR 71
3.1.1. Модельная система, используемая в работе 72
3.1.2. Определение антипролиферативного и проапоптотического эффектов энантиомеров CpdA 75
3.1.3. Антипролиферативные и проапоптотические эффекты новосинтезированных химических производных CpdA 80
3.2. Оценка эффектов исследуемых соединений на функциональную активность глюкокортикоидного рецептора 86
3.2.1. Исследование способности энантиомеров CpdA к запуску транс-репрессии и транс-активации 86
3.2.2. Оценка влияния новосинтезированных химических производных CpdA на функциональную активность глюкокортикоидного рецептора 98
3.3. Исследование мутагенной активности энантиомеров CpdA и новосинтезированных химических производных CpdA 116
3.4. Оценка противоопухолевого эффекта наиболее активного химического производного CpdA, CpdA-03, in vivo 121
4. Обсуждение результатов 123
Заключение 134
Выводы 135
Список сокращений 136
Список литературы 139
