Введение
1. Введение 5
2. Взаимодействие блеомицина и его олигонуклеотидных производных с нуклеиновыми кислотами 8
2.1. Общая характеристика блеомицинов 8
2.2. Структура блеомицинов 9
2.3. Активация комплексов блеомицина с ионами железа 10
2.4. Связывание блеомицина с нуклеиновыми кислотами 12
2.5. Специфичность расщепления нуклеиновых кислот блеомиципом 14
2.6. Эффективность расщепления РНК блеомицином 23
2.6.1. Сравнение эффективности расщепления различных РНК 23
2.6.2. Зависимость эффективности расщепления от концентрации ионов магния 23
2.7. Продукты расщепления нуклеиновых кислот блеомицином 25
2.8. Свойства конъюгатов блеомицина с олигонуклеотидами 30
2.8.1. Синтез конъюгатов блеомицина с олигонуклеотидами 30
2.8.2. Стабилизация комплементарных комплексов конъгогагмишень остатком блеомицина 30
2.8.3. Сайт-специфическое расщепление одноцепочечных ДНК 30
2.8.4. Каталитическое расщепление одпоцепочечной ДНК олигонуклеотидным конъюгатом блеомицина 31
2.8.5. Расщепление двуцепочечной ДНК в составе триплекса 32
3. Расщепление нуклеиновых кислот блеомициновыми производными олигонуклеотидов 34
3.1. Синтез блеомициновых производных олигонуклеотидов 34
3.1.1. Синтез стандартных конъюгатов 35
3.1.2. Синтез линкерсодержащих конъюгатов блеомицина с олигонуклеотидами 36
3.2. Расщепление одноцепочечных ДНК конъгагатами блеомицина с олигонуклеотидами 39
3.2.1. Расщепление одноцепочечных ДНК коиъюгатами блеомицина с протяженной оли гонуклеотидной частью 39
3.2.2. Расщепление ДНК конъюгатами блеомицина с короткими олигонуклеотндами вприсутствии олигонуклеотидных эффекторов 42
3.2.2.1. Факторы, определяющие эффективность расщепления одноцепочечных ДНК конъюгатами блеомицина с короткими олигонуклеотндами в составе тандемных комплексов 47
3.2.3. Влияние гидрофобных и гетероциклических группировок Б составе конъюгата и эффекторов на эффективность расщепления одноцепочечной ДНК конъюгатами блеомицина с короткими олигонуклеотндами в составе тандемных комплексов 57
3.3. Субстратные свойства гибридных дуплексов, образованных с участием тандемов производных коротких олигонуклеотидов по отношению к рибонуклсазе Н Е, coli 60
3.3.1. Гидролиз РНК рибонуклеазой Н Е. coli в составе гибридного дуплекса, образованного с участием немодифицированного тандема коротких олигодезоксирибонуклеотидов 60
3.3.2. Субстратные свойства тандемных гибридных дуплексов, содержащих конъюгаты блеомицина с короткими олигонуклеотндами, по отношению к рибонуклеазе Н Е. coli67
3.4. Расщепление РНК конъюгатами блеомицина с олигодезоксирибонуклеотидами 76
3.5. Расщепление двуцепочечной ДНК конъюгатами блеомицина с триплекс- формирующими олигонуклеотидами (ТФО) 80
3.6. Заключение 83
4. Экспериментальная часть 85
4.1. Исходные материалы 85
4.2. Основные методы работы 85
4.2.1. Хроматографические методы 86
4.2.2. Электрофорез 86
4.2.3. Спектрофотометрия 87
4.3. Методики эксперимента 88
Выводы 91
