Введение
ГЛАВА 1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 12
1.1 Вирусные болезни малины 12
1.2 Способы передачи ВККМ и других вирусов 14
1.3 Симптомы поражения ВККМ растений рода Rubus 16
1.4 Проблемы распространения ВККМ в посадках малины 19
1.5 Круг растений, поражаемых ВККМ 23
1.6 Систематическое положение ВККМ и свойства вирусных частиц 26
1.7 Характеристика изолятов ВККМ 31
1.8 Эффективность методов оздоровления малины от ВККМ и других вирусных болезней 33
1.9 Методы диагностики ВККМ и других вирусов 40
1.10 Создание сортов малины, устойчивых к ВККМ 44
ГЛАВА 2 МЕТОДИКА И УСЛОВИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 48
2.1 Характеристика объекта исследований 48
2.2 Выделение РНК из растений малины 50
2.2.1 Выделение тотальной РНК из растительного материала методом экстракции гуанидинизотиоционатом 51
2.2.2 Выделение тотальной РНК из растительного материала фенолхлороформенным методом с применением для экстракции SDS... 54
2.2.3 Выделение тотальной РНК из растительного материала методом экстракции горячим фенолом 56
2.2.4 Выделение тотальной РНК из растительного материала фенолтриизопропилнафталинсульфонатным методом 57
2.3 Расчет концентрации РНК и определение качества полученных препаратов 58
2.4 Разработка методики диагностики ВККМ с помощью RT-PCR 60
2.4.1 Обратная транскрипция 61
2.4.2 Полимеразная цепная реакция 63
2.5 Конструирование вектора, содержащего фрагмент ВККМ 65
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 67
3.1 Оптимизация методов выделения РНК из тканей малины 67
3.2 Диагностика вируса кустистой карликовости малины в тканях малины методом RT-PCR 77
3.2.1 Характеристика праймеров, используемых для диагностики ВККМ методом RT-PCR 77
3.2.2 Положительные и отрицательные контроли при проведении RT-PCR 84
3.2.3 Влияние концентрации РНК малины для обратной транскрипции на протекание RT-PCR 88
3.2.4 Влияние методов выделения РНК на эффективность диагностики ВККМ в тканях малины методом RT-PCR 91
3.3 Скрининг ВККМ методом RT-PCR в полевых растениях, сеянцах и пробирочных растениях малины, размножаемой в культуре in vitro 95
3.3.1 Анализ ВККМ в цветущих растениях и сеянцах некоторых форм малины в полевых условиях 96
3.3.2 Диагностика ВККМ в растениях ремонтантной малины на разных стадиях годового цикла развития 104
3.3.3 Анализ ВККМ в растениях ремонтантной малины, размножаемых в культуре in vitro 107
3.4 Анализ нуклеотидной последовательности изолята ВККМ,
распространенного в посадках малины 116
ГЛАВА 4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 122
ВЫВОДЫ 127
РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ 129
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 130
ПРИЛОЖЕНИЕ 158
