Введение
ГЛАВА 1. Литературный обзор 10
1.1. Род Brassica как объект исследования 10
1.1.1. Систематика рода Brassica 11
1.1.2. Эволюция и геномные взаимосвязи видов Brassica 16
1.1.3. Селекция и регистрация культурных форм Brassica 19
1.1.3.1. Селекция хозяйственно-ценных признаков 19
1.1.3.2. Селекция культур Brassica, устойчивых к болезням и неблагоприятным условиям среды 23
1.1.3.3. Регистрация сортов 27
1.2. Молекулярные маркеры в генотипировании растений рода Brassica 28
1.2.1. Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов (RFLP-маркеры) 29
1.2.2. Произвольно амплифицируемые ДНК-маркеры (RAPD-маркеры) 30
1.2.3. Анализ полиморфизма длин амплифицированных фрагментов
(AFLP-маркеры) 33
1.2.4.1 Іолиморфизм простых повторяющихся последовательностей
(SSR-маркеры) 35
1.2.5.1 Іолиморфизм межмикросателлитных последовательностей (ISSR-маркеры) 41
1.2.6. Полиморфизм селективно амплифицируемых микросателлитных локусов (SAMPL-маркеры) 42
1.2.7. Амнлифицируемые маркеры с известной нуклеотидной последовательностью (STS и SCAR-маркеры) 43
ГЛАВА 2. Материалы и методы 45
2.1. Материалы и реактивы 45
2.2. Приборы и методы 49
2.3. Общие методики 50
2.3.1. Выращивание растений 50
2.3.2. Выделение геномной растительной ДНК СТАВ-методом 50
2.3.3. Выделение геномной растительной ДНК на силикагелевомсорбенте 51
2.3.4. Выделение плазмидной ДНК 52
2.3.5. Полимеразная цепная реакция 53
2.3.6. Электрофорез в агарозном геле 53
2.3.7. Электрофорез в полиакриламидном іеле 54
2.3.8. Визуализация ДНК в полиакриламидном геле с помощью нитрата серебра. 54
2.3.9. Анализ флуоресцентно-меченных ПЦР-фрагментов 55
2.3.10. Секвенирование ДНК-матриц по Сэнгеру 55
2.3.11. Приготовление маркера длины pUC18/MspI 56
2.3.12. Проведение ферментативных реакций 56
2.3.13. Клонирование амплифицированных фрагментов ДНК 57
2.3.14. Трансформация и анализ клонов 57
2.3.15. Анализ клонов с помощью ПЦР-амплификации 58
2.3.16. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей микросателлитных фрагментов 58
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 59
3.1. Исследование генетического разнообразия растений рода Brassica 63
3.1.1. Выбор праймеров для анализа полиморфизма микросателлитных локусов... 63
3.1.2. Микросателлитный анализ видов Brassica и родственных представителей семейства Brassicaceae 66
3.1.3. Оценка і енетического полиморфизма видов и разновидностей Brassica 82
3.2. Исследование интрогрессии генетического материала геномов А, В и С
Brassica в межвидовые и межродовые гибриды 90
3.3. Исследование природы полиморфизма микросателлитных локусов геномов А,
В и С Brassica 93
3.4. Создание SCAR-маркера для анализа интрогрессии В-генома Brassica 100
3.5. Практическое применение метода микросателлитного анализа в селекции... 104
3.5.1. Генотипирование близкородственных сортов рапса {В парт) 104
3.5.2. Исследование интрогрессии аллельных форм микросателлитных локусов листовых овощных сортов В гара в их гибриды 106
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 114
ВЫВОДЫ 115
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 118
ПРИЛОЖЕНИЕ 142
