Введение
Аналитический обзор 6
1.1 Народнохозяйственное значение можжевеловых лесов 6
1.2 Химический состав хвои Juniperus 7
1.3 Культура клеток и тканей растений в решении задач биотехнологии 12
1.3.1 Вторичный метаболизм в условиях in vitro 22
1.3.1 Культивирование хвойных пород в условиях in vitro 26
Методическая часть 32
2.1 Объект исследования 32
2.2 Исследование химического состава хвои Juniperus sibirica В 34
2.3 Определение влажности 38
2.4 Определение суммарного содержания алкалоидов 38
2.5 Определение содержания подофиллотоксина в хвое 39
2.6 Определение флавоноидов 40
2.7 Определение сапонинов 41
2.8 Количественное определение витаминов 42
2.9 Определение содержания хлорофилла А, Б и каротина 44
2.10 Разделение липидов на силикагеле 45
2.11 Спектрометрическое определение содержания белка 46
2.12 Определение минеральных компонентов 47
2.13 Определение концентрации редуцирующих веществ 48
2.14 Определение легкогидролизуемых полисахаридов 49
2.15 Определение трудногидролизуемых полисахаридов 50
2.16 Определение содержания лигнина 51
2.17 Определение содержания эфирного масла 52
2.18 Определение экстрактивных веществ 53
2.19 Введение в культуру Juniperus sibirica В 53
2.20 Получение каллусной ткани Juniperus sibirica В 54
2.21 Иммобилизация растительных тканей на инертные носители 56
2.22 Методы оценки физиологического состояния культуры 57
2.23 Определение содержание подофиллотоксина в клеточной биомассе методом ВЭЖХ 58
2.24 Определение подофиллотоксина в клеточной биомассе методом ИК спектров 59
3 Экспериментальная часть 61
3.1 Химический состав хвои Juniperus sibirica В 61
3.2 Культивирование Juniperus sibirica В. в условиях in vitro 69
3.2.1 Получение интактных стерильных растений и введение в культуру in vitro 69
3.2.2 Влияние фитогормонов на каллусогенез Juniperus sibirica В 73
3.2.3 Влияние типа эксплантов Juniperus sibirica В. на каллусогенез 76
3.2.4 Получение каллусных культур 80
3.2.5 Влияние способа культивирования на рост каллусной ткани Juniperus sibirica В 83
3.2.6 Микроклональное размножение Juniperus sibirica В 88
3.2.6.1 Стимулирование развития пазушных (спящих) почек 88
3.2.6.2 Культивирование побегов Juniperus sibirica В 93
3.2.6.3 Укоренение размноженных побегов Juniperus sibirica В. и адаптация к условиям in viv о 94
4 Выделение подофиллотоксина из хвои и каллусной ткани Juniperus sibirica В 100
5 Микроклональное размножение Juniperus sibirica В. в условиях in vitro 105
Выводы 108
Список используемых источников 109
Приложение 122
